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LncRNA-HMG如何促進(jìn)p53泛素化？

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-11-25


LncRNA-HMG協(xié)助MDM2增加p53的泛素化

第一步，LncRNA-HMG與p53互作，并促進(jìn)p53泛素化

為了研究LncRNA-HMG如何調(diào)節(jié)p53的穩(wěn)定性。RIP實(shí)驗(yàn)證實(shí)p53與LncRNA-HMG互作（圖2a）。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）對(duì)于調(diào)節(jié)p53的穩(wěn)定性至關(guān)重要。因此，利用蛋白酶體抑制劑MG132分析LncRNA-HMG調(diào)控p53穩(wěn)定是否依賴(lài)于UPS。發(fā)現(xiàn)MG132處理能逆轉(zhuǎn)LncRNA-HMG缺失誘導(dǎo)的p53升高（圖2b），表明LncRNA-HMG以蛋白酶體依賴(lài)的方式調(diào)節(jié)p53蛋白水平。此外，Co-IP分析顯示在LncRNA-HMG缺失的細(xì)胞中，p53的泛素化水平降低（圖2c），而LncRNA-HMG過(guò)表達(dá)可促進(jìn)p53的泛素化（圖2d）。表明LncRNA-HMG促進(jìn)p53泛素化，導(dǎo)致p53降解。


第二步，LncRNA-HMG增強(qiáng)MDM2對(duì)p53的活性 LncRNA-HMG如何促進(jìn)p53泛素化具有重要意義。MDM2是p53較重要的泛素連接酶。推測(cè)LncRNA-HMG可能增強(qiáng)了MDM2對(duì)p53的活性。Co-IP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，LncRNA-HMG同時(shí)結(jié)合p53和MDM2（圖2e）。RIP實(shí)驗(yàn)顯示，LncRNA-HMG與MDM2相互作用（圖2f）。RNA pulldown實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)LncRNA-HMG與p53或MDM2結(jié)合（圖2g）。

另外，LncRNA-HMG對(duì)MDM2水平?jīng)]有影響（圖2h）。LncRNA-HMG的缺失減少p53和MDM2之間的相互作用（圖2i），LncRNA-HMG過(guò)表達(dá)則增加MDM2介導(dǎo)的p53泛素化（圖2j）。此外，MDM2拮抗劑Nutlin-3消除了LncRNA-HMG對(duì)p53蛋白水平的影響（圖2k）。表明LncRNA-HMG促進(jìn)MDM2與p53的相互作用，增強(qiáng)p53的泛素化。


后續(xù)的功能回復(fù)實(shí)驗(yàn)顯示，LncRNA-HMG依賴(lài)于p53調(diào)節(jié)ROS狀態(tài)（圖2l-m）。

圖2 LncRNA-HMG協(xié)助MDM2增加p53的泛素化（Ref. Fig 5/S4）


全文分享：【《Redox Biol》解讀：作為支架lncRNA！LncRNA-HMG通過(guò)抑制p53介導(dǎo)的鐵死亡刺激結(jié)直腸癌細(xì)胞產(chǎn)生化療耐藥】。


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