閔行區(qū)質(zhì)量探針推薦貨源

為了確定探針是否與相應(yīng)的基因組DNA雜交，有必要對(duì)探針加以標(biāo)記，以便在結(jié)合部位獲得可識(shí)別的信號(hào),通常采用放射性同位素32P標(biāo)記探針的某種核苷酸α磷酸基。但近年來已發(fā)展了一些用非同位素如生物素-親合素系統(tǒng)、地高辛配體等作為標(biāo)記物的方法。非同位素標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)是保存時(shí)間較長(zhǎng),而且避免了同位素的污染。**常用的探針標(biāo)記法是缺口平移法(nick translation)。首先用適當(dāng)濃度的DNA酶Ⅰ（DNAseⅠ）在探針DNA雙鏈上造成缺口，然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ（DNa poly merasⅠ）的5’→3’的外切酶活性，切去帶有5’磷酸的核苷酸；同時(shí)又利用該酶的5’→3’聚酶活性，使32P標(biāo)記的互補(bǔ)核苷酸補(bǔ)入缺口，DNA聚合酶Ⅰ的這兩種活性的交替作用，使缺口不斷向3’的方向移動(dòng)，同時(shí)DNA鏈上的核苷酸不斷為32P標(biāo)記的核苷酸所取代。分析對(duì)象是固體物質(zhì)表面細(xì)小顆?；蛭⑿^(qū)域，小范圍直徑為1μm。閔行區(qū)質(zhì)量探針推薦貨源

DNA探針根據(jù)其來源分為3種：一種來源于基因組中的基因本身，稱為基因組探針（genomic probe），可以是基因的全序列，或者基因上的一段序列；另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA，再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針，稱為cDNA探針（cDNA probe）；此外，還可在體外人工合成20～50個(gè)堿基的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段，稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。要得到一種特異性DNA探針，常常是比較煩瑣的。以細(xì)菌為例，細(xì)菌的基因組大小約為5×106堿基，約含3000個(gè)基因。要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針，通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫(kù)的辦法，即將細(xì)菌DNA切成小片段后（如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解）分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫(kù)，然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選，產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除，***剩下的不與任何其他細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段。上海優(yōu)勢(shì)探針五星服務(wù)近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置，可在觀察微區(qū)形貌的同時(shí)逐點(diǎn)分析試樣的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)。

血凝素與生物素有非常高的親和性，當(dāng)血凝素標(biāo)記上過氧化物酶或堿性磷酸酶，經(jīng)雜交反應(yīng)**終形成探針-生物素-血凝素酶復(fù)合物（ABC法），酶催化底物顯色，觀察結(jié)果。ABC法底物顯色生成不溶物，以便觀測(cè)結(jié)果。酶標(biāo)記法復(fù)雜、重復(fù)性差，成本高，但便于運(yùn)輸、保存，靈敏度與放射物標(biāo)記法相當(dāng)。探針標(biāo)記方法①缺口平移標(biāo)記法。利用的是DNA聚合酶I能修復(fù)DNA鏈的功能。該法先由DNaseI在DNA雙鏈上隨機(jī)切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同時(shí)在3´端修復(fù)加入被標(biāo)記核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低、比活性相對(duì)較高、標(biāo)記均勻，多用于大分子DNA標(biāo)記，(>1000bp比較好)，但單鏈DNA、RNA不能用該法標(biāo)記。

值得一提的是，通過改變外源基因的插入方向或選用不同的RNA聚合酶，可以控制RNA的轉(zhuǎn)錄方向，即以哪條DNA鏈以模板轉(zhuǎn)錄RNA。這種可以得到同義RNA探針（與mRNA同序列）和反義RNA探針（與mRNA互補(bǔ)），反義RNA又稱cRNA，除可用于反義核酸研究外，還可用于檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平。在這種情況下，因?yàn)樘结樅桶行蛄芯鶠閱捂?，所以雜交的效率要比DNA-DNA雜交高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。RNA探針除可用于檢測(cè)DNA和mRNA外，還有一個(gè)重要用途，在研究基因表達(dá)時(shí)，常常需要觀察該基因的轉(zhuǎn)錄狀況。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機(jī)系統(tǒng)以外，還主要包括分光系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)等部分。

用此探針在DNA文庫(kù)中篩選，陽性克隆即是目標(biāo)蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細(xì)胞和原核細(xì)胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內(nèi)含子序列，而原核則沒有。因此，真核基因組DNA探針用于檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針（包括cDNA探針）的主要優(yōu)點(diǎn)有下面三點(diǎn)：①這類探針多克隆在質(zhì)粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡，制備方法簡(jiǎn)便。②DNA探針不易降解（相對(duì)RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標(biāo)記方法較成熟，有多種方法可供選擇，如缺口平移，隨機(jī)引物法，PCR標(biāo)記法等，能用于同位素和非同位素標(biāo)記。電子探針可以對(duì)試樣中微小區(qū)域（微米級(jí)）的化學(xué)組成進(jìn)行定性或定量分析。上海優(yōu)勢(shì)探針五星服務(wù)

電子束轟擊樣品表面將產(chǎn)生特征X射線，不同的元素有不同的X射線特征波長(zhǎng)和能量。閔行區(qū)質(zhì)量探針推薦貨源

③末端標(biāo)記法（又叫尾標(biāo)）。利用末端轉(zhuǎn)移酶可進(jìn)行“尾標(biāo)”，尾標(biāo)適用于寡核苷酸探針標(biāo)記，寡核苷酸探針多用于核酸“點(diǎn)”突變的檢測(cè)，該探針可用核酸合成儀人工合成，克隆出的探針一般較長(zhǎng)，特異性好，標(biāo)記量大，雜交的檢出信號(hào)強(qiáng)。探針合成的注意事項(xiàng)①合成探針的長(zhǎng)短，一般在20~50個(gè)核苷酸之間。合成過長(zhǎng)成本高，且易出現(xiàn)聚合酶合成錯(cuò)誤，雜交時(shí)間長(zhǎng)，合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應(yīng)含40%~60%，一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過4個(gè)，以免非特異性雜交產(chǎn)生。③探針自身序列內(nèi)應(yīng)無互補(bǔ)區(qū)域，以免產(chǎn)生“發(fā)夾”結(jié)構(gòu)，影響雜交?？傊?，一個(gè)好的探針**終要在實(shí)踐中才能加以確認(rèn)。閔行區(qū)質(zhì)量探針推薦貨源

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