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1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類(lèi)。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,參與細(xì)胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強(qiáng),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。表1-1幾種常用的BSS配方(g/L)天然培養(yǎng)基指來(lái)自動(dòng)物體液或利用**分離提取的一類(lèi)培養(yǎng)基,如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。其***是營(yíng)養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜,來(lái)源受限且制作過(guò)程復(fù)雜、批間差異大。目前***使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種**提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類(lèi)物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。重慶無(wú)血清培養(yǎng)基大概價(jià)格多少F12培養(yǎng)基常用于神經(jīng)細(xì)胞和其他敏感細(xì)胞系。
Nutrientagar)培養(yǎng)基品牌:安捷倫型號(hào):1260Lnifntiy參考報(bào)價(jià):20萬(wàn)-50萬(wàn)培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng)1.培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外.一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料.加以比較核對(duì).再依據(jù)自己的使用目的加以選用,記錄其來(lái)源。2.培養(yǎng)基的制備記品牌:安捷倫型號(hào):1260Lnifntiy參考報(bào)價(jià):20萬(wàn)-50萬(wàn)【分享】146種培養(yǎng)基的制備和大家一起分享bbs/images/品牌:安捷倫型號(hào):1260Lnifntiy參考報(bào)價(jià):20萬(wàn)-50萬(wàn)培養(yǎng)基制備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)名稱(chēng):培養(yǎng)基制備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)關(guān)鍵詞:培養(yǎng)基制備標(biāo)準(zhǔn)操作程序目的:如何使用成品培養(yǎng)基干粉制備各種合格的分離培養(yǎng)基。背景知識(shí):選填項(xiàng)目原理:選填項(xiàng)目主體內(nèi)容:操作步驟1.在玻璃容器中加入所需蒸餾水的二分之一量,品牌:安捷倫型號(hào):1260Lnifntiy參考報(bào)價(jià):20萬(wàn)-50萬(wàn)酵母培養(yǎng)基的制備一、目的要求了解合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基的配制原理。學(xué)習(xí)和掌握麥芽汁培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基和察氏培養(yǎng)基的配制方法。
5)微量元素:硒是**常見(jiàn)的。①無(wú)蛋白無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基(proteinfreemidium,PFM)這類(lèi)培養(yǎng)基完全不含有動(dòng)物來(lái)源蛋白,但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段,以及類(lèi)固醇***和脂類(lèi)前體等,以替代動(dòng)物***、生長(zhǎng)因子的作用。其特點(diǎn)是完全沒(méi)有蛋白或蛋白含量極低,有利于生物制品的分離純化。④化學(xué)組份限定無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基(Chemicallydefinedmedia,CDM)此類(lèi)培養(yǎng)基是目前**安全、**為理想的無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基,所有成份的濃度都完全明確,即使其所添加的少量蛋白,也是可經(jīng)過(guò)純化處理,成份明確、濃度確定的蛋白。這類(lèi)培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性,提高了生產(chǎn)工藝的重復(fù)性,并有效降低了純化成本。嚴(yán)格意義上來(lái)說(shuō),個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基不在細(xì)胞培養(yǎng)基的傳統(tǒng)分類(lèi)之列,其具體是指一類(lèi)根據(jù)細(xì)胞特性、細(xì)胞培養(yǎng)工藝特點(diǎn)、使用者需求習(xí)慣而量身定制的細(xì)胞培養(yǎng)基,主要目的是提高細(xì)胞產(chǎn)率、產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)品安全性和降低血清的使用等。個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基可能是無(wú)血清培養(yǎng)基,也可能是低血清培養(yǎng)基,**終是為滿足某一種或某一類(lèi)生物制品的生產(chǎn)需求。2.培養(yǎng)基的基本組分細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。F12培養(yǎng)基含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),支持細(xì)胞的生長(zhǎng)。
流加質(zhì)量百分比濃度為20%的葡萄糖維持殘?zhí)遣坏陀冢?,流加消泡劑消泡。?shí)施例2一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基,其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b;所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加,然后間隔24h添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為:取各原料:葡萄糖100g/l,酵母浸膏25g/l,k2hpo41g/l,mgso4·7h2o70mg/l,2-羥基乙胺20mg/l,cecl35mg/l,mnso4·h2o2mg/l,feso4·7h2o2mg/l,vb15mg/l,生物素5μg/l;將各原料攪拌均勻后,調(diào)節(jié)ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基a;所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為:取各原料:琥珀酸7g/l,尿素2g/l,殼聚糖50mg/l;將各原料攪拌均勻后,調(diào)節(jié)ph為,121℃**15min,自然冷卻,制得發(fā)酵培養(yǎng)基b;采用常規(guī)發(fā)酵工藝:將黃色短桿菌gdk-9按8%接種量將種子液(od600nm為)接入裝有60l發(fā)酵培養(yǎng)基a的100l發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),發(fā)酵培養(yǎng)24h,然后添加10l發(fā)酵培養(yǎng)基b,繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)24h,收集發(fā)酵液;整個(gè)發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中,控制發(fā)酵溫度35℃,通風(fēng)比1∶,攪拌轉(zhuǎn)速300r/min,溶氧維持在20%,流加質(zhì)量百分比濃度為20%的葡萄糖維持殘?zhí)遣坏陀冢ィ骷酉輨┫?。?shí)施例3一、cecl3稀土鹽對(duì)菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。DMEM培養(yǎng)基在實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。山東DMEM/F12培養(yǎng)基產(chǎn)品介紹
無(wú)血清培養(yǎng)基提供了無(wú)血清的純凈環(huán)境。內(nèi)蒙古MEM培養(yǎng)基采購(gòu)
按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測(cè)定法進(jìn)行。滲透壓溶劑通過(guò)半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱(chēng)為滲透,阻止?jié)B透所需施加的壓力,稱(chēng)為滲透壓。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,動(dòng)物細(xì)胞借助K+、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過(guò)高容易使細(xì)胞脫水萎縮,培養(yǎng)液滲透壓過(guò)低容易使細(xì)胞膨脹破裂,因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測(cè)定法進(jìn)行。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物,而是**死亡或解體后才釋放出來(lái)的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基**內(nèi)***過(guò)高,對(duì)生物制品*苗(如狂犬、乙肝*苗)、基因工程*品等注射用的*品都需要檢查**內(nèi)***。因此本項(xiàng)目的檢驗(yàn)符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基的**內(nèi)***標(biāo)準(zhǔn)定為<10EU/ml。稱(chēng)取本品規(guī)定量(見(jiàn)表4-12)的1/100,加入**內(nèi)***檢查用水10mL溶解,吸取該溶液mL加**內(nèi)***檢查用水mL,混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪE**內(nèi)***檢查法中的凝膠法進(jìn)行。微生物限度細(xì)胞培養(yǎng)基不是無(wú)菌產(chǎn)品,其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖。內(nèi)蒙古MEM培養(yǎng)基采購(gòu)