0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見(jiàn)的一些問(wèn)題。 胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。 胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存。胰酶使用的時(shí)候要注意什么？（1）在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。（2）胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。 胰蛋白酶可以用于原代細(xì)胞的傳代過(guò)程中分散組織。中國(guó)臺(tái)灣EDTA胰酶市場(chǎng)報(bào)價(jià)1、胰酶是，就是說(shuō)PBS,注...

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin)，EDTA等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在℃時(shí)，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（）...

胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在已經(jīng)擴(kuò)展到多種來(lái)源，包括哺乳動(dòng)物（人、牛、豬和狗）、無(wú)脊椎動(dòng)物和微生物等。胰蛋白酶的商業(yè)化生產(chǎn)主要依賴(lài)哺乳動(dòng)物的胰腺組織提取或者重組表達(dá)提取。直接從哺乳動(dòng)物胰腺組織中提取的缺點(diǎn)是生產(chǎn)成本高，易造成其他結(jié)構(gòu)相近的蛋白污染。重組表達(dá)提取胰蛋白酶可以縮短提取時(shí)間、降低生產(chǎn)成本，提取的蛋白純度高，通過(guò)優(yōu)化重組表達(dá)體系可以提高蛋白的表達(dá)量，這些優(yōu)勢(shì)為其在醫(yī)療、食品等行業(yè)中的應(yīng)用提供了更多的可能性。[1]折疊胰酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用？重慶重組胰酶報(bào)價(jià) 胰酶消化細(xì)胞的原理首先，胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到胰腺的分泌。當(dāng)我們進(jìn)食后，胃內(nèi)的食物會(huì)刺激胃...

胰酶使用注意：1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。胰酶配制方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對(duì)細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)，過(guò)濾除菌。）3、pbs（：稱(chēng)取胰酶粉末，先用少許滅菌過(guò)的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜，過(guò)濾滅菌，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱(chēng)取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許...

但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為，pI=，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對(duì)酶的保護(hù)作用不及牛羊的明顯，無(wú)螯合Ca2+的中心部位。有6對(duì)二硫鍵，斷裂1~2個(gè)鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護(hù)了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專(zhuān)一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴(lài)氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進(jìn)一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤(pán)車(chē)、蝲姑、放線菌等范圍***的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和癥等...

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見(jiàn)的一些問(wèn)題。胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異？商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過(guò)程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時(shí)候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引...

胰蛋白酶：（Trypsin）為蛋白酶的一種，是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，主要切割賴(lài)氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化（如雞胚原代成纖維細(xì)胞）可用胰酶進(jìn)行消化，可以不加E...

但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為，pI=，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對(duì)酶的保護(hù)作用不及牛羊的明顯，無(wú)螯合Ca2+的中心部位。有6對(duì)二硫鍵，斷裂1~2個(gè)鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護(hù)了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專(zhuān)一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴(lài)氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進(jìn)一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤(pán)車(chē)、蝲姑、放線菌等范圍***的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和癥等...

但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為，pI=，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對(duì)酶的保護(hù)作用不及牛羊的明顯，無(wú)螯合Ca2+的中心部位。有6對(duì)二硫鍵，斷裂1~2個(gè)鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護(hù)了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專(zhuān)一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴(lài)氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進(jìn)一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。除存在于脊椎動(dòng)物外，還存在于蠶、海盤(pán)車(chē)、蝲姑、放線菌等范圍***的生物體中。另外與高等動(dòng)物的血液凝固和癥等...

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴(lài)氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取，經(jīng)過(guò)純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時(shí)不可逆失活。鈣離子對(duì)胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用。[1]0.25%胰酶細(xì)胞消化液(含有EDTA，含酚紅)消化細(xì)胞時(shí)間不宜...

①制備粗酶液稱(chēng)取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解，然后進(jìn)行真空過(guò)濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)挂鹊鞍酌富钚詾?-10U/mg，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱(chēng)取，加入10L異辛烷，在攪拌下使其形成均勻的分散液，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h，獲得濃度為。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3...

1、胰酶是，就是說(shuō)PBS,注意，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將p...

胰酶消化細(xì)胞的原理首先，胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到胰腺的分泌。當(dāng)我們進(jìn)食后，胃內(nèi)的食物會(huì)刺激胃黏膜釋放胃液，同時(shí)也會(huì)刺激胰腺分泌胰液。胰液中含有多種酶類(lèi)物質(zhì)，其中包括胰蛋白酶、胰脂酶和胰淀粉酶等。這些酶類(lèi)物質(zhì)會(huì)通過(guò)胰管進(jìn)入到小腸內(nèi)，開(kāi)始對(duì)食物進(jìn)行消化作用。其次，胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到酶與底物的結(jié)合。胰酶在小腸內(nèi)與食物中的蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物等成分結(jié)合，形成酶-底物復(fù)合物。胰蛋白酶主要作用于蛋白質(zhì)，能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)分解為氨基酸；胰脂酶主要作用于脂肪，能夠?qū)⒅痉纸鉃楦视秃椭舅?；胰淀粉酶主要作用于碳水化合物，能夠?qū)⒌矸鄯纸鉃槠咸烟恰?**，胰酶消化細(xì)胞的原理涉及到產(chǎn)物的吸收。經(jīng)過(guò)胰酶...

EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說(shuō)，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制...

胰蛋白酶：（Trypsin）為蛋白酶的一種，是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽，主要切割賴(lài)氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化（如雞胚原代成纖維細(xì)胞）可用胰酶進(jìn)行消化，可以不加E...

先用少許**過(guò)的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜，過(guò)濾**，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱(chēng)取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（左右）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過(guò)濾**，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度為或。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右。）一般**，至于作用效果，需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過(guò)夜...

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么？胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶可以用于原代...

在253nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，必要時(shí)可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)，使吸光度在～，作為底物溶液。制成后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本品適量，加～60胰蛋白酶單位的溶液。測(cè)定法取底物溶液，加μl，混勻，作為空白。另取供試品溶液200μl，加底物溶液（恒溫于℃±℃），立即計(jì)時(shí)，混勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在253nm的波長(zhǎng)處，每隔30秒鐘讀取吸光度，共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖；每30秒鐘吸光度的改變應(yīng)恒定在～，呈線性關(guān)系的時(shí)間不得少于3分鐘。若不符合上述要求，應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度，...

EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說(shuō)，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō)，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制...

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電...

品名：0.25%胰蛋白酶溶液，1X分類(lèi)：細(xì)胞消化試劑規(guī)格：100ML用途：消化試劑，如胰蛋白酶，被用于將粘附細(xì)胞從其附著的表面或底物上分離和降解，以及將組織進(jìn)行游離，以開(kāi)展原代細(xì)胞培養(yǎng)。產(chǎn)品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶（1：250）以及一種新型非哺乳動(dòng)物豬胰蛋白酶替代品，稱(chēng)為T(mén)hermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液，可以快速消化，同時(shí)不損傷細(xì)胞。其非哺乳動(dòng)物配方使它適用于無(wú)血清應(yīng)用，不需要失效或?qū)γ敢种苿?。此試劑可使?xì)胞被快速分離，形成單細(xì)胞懸浮物，保持高細(xì)胞活力，并使傳代時(shí)的變異減至**小。有些胰酶溶液里含有酚紅作為P...

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？能，對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用。細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響？細(xì)胞消化時(shí)，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要徹底清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。新疆進(jìn)口胰酶常見(jiàn)問(wèn)題 0.25%胰酶是細(xì)胞生物...

胰蛋白酶（Trypsin）簡(jiǎn)稱(chēng)胰酶，是一種絲氨酸水解酶，能把多肽鏈中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng)，以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液，用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì)，使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解，起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑，溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色，偏酸性時(shí)呈橘紅色，近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s緩沖液，不含EDTA，無(wú)酚紅指示劑，經(jīng)0.22...

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么？胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。0.25%胰酶消化液...

使**或細(xì)胞片分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長(zhǎng)短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等）、消化時(shí)的溫度（氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤(rùn)；一般消化時(shí)間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細(xì)胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為透明、點(diǎn)狀（出現(xiàn)細(xì)小空隙）時(shí)，棄去細(xì)胞消化液，或看見(jiàn)培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的完全培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；如見(jiàn)大量細(xì)胞片狀脫落，已消化過(guò)頭，則不能頃倒消...

冰凍保存，但不得反復(fù)凍融。供試品溶液的制備取本品適量，精密稱(chēng)定，加。測(cè)定法取底物溶液、（pH）1ml，混勻，作為空白。取供試品溶液（預(yù)熱至25℃±℃），立即計(jì)時(shí)并搖勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見(jiàn)分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在237nm的波長(zhǎng)處，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘，每30秒鐘吸光度的變化率應(yīng)恒定，且恒定時(shí)間不得少于3分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖，取在3分鐘內(nèi)成直線部分的吸光度，按下式計(jì)算。式中P為每2500胰蛋白酶單位中含糜蛋白酶的量，單位；A2為直線上開(kāi)始的吸光度；A1為直線上終止的吸光度；T為A2至A1讀數(shù)的時(shí)間，分；W為...

細(xì)胞消化胰酶的配制對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱(chēng)胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過(guò)夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過(guò)濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0...

胰蛋白酶（Trypsin）簡(jiǎn)稱(chēng)胰酶，是一種絲氨酸水解酶，能把多肽鏈中賴(lài)氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng)，以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液，用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì)，使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解，起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑，溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色，偏酸性時(shí)呈橘紅色，近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s緩沖液，不含EDTA，無(wú)酚紅指示劑，經(jīng)0.22...

胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來(lái)分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過(guò)程它可以被看成一種簡(jiǎn)單的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì)，然后這些留下的物質(zhì)可以用來(lái)維持細(xì)胞的高能量水平這種過(guò)程通過(guò)將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來(lái)發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子，通常有四種類(lèi)型，它們是肽酶，脂水解酶，載脂蛋白酶和糖水解酶，分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類(lèi)物質(zhì)分解為更小的離子和分子，以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì)，維持其自身的正常功能和形態(tài)。胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。中國(guó)臺(tái)灣進(jìn)口胰酶產(chǎn)品介紹胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間...

6.磷酸酶EDTA相對(duì)不溶?？梢杂么帕嚢杵鲾嚢?，或?qū)⑵渲糜?度的冰箱中，溶解后過(guò)濾并**。7.可配備2-3倍血漿酶，節(jié)省時(shí)間和過(guò)濾器。使用時(shí)，請(qǐng)對(duì)PBS消毒。8.將儲(chǔ)存溶液儲(chǔ)存在-20°C的冰箱中，然后將溶液儲(chǔ)存在4°C。使用時(shí)，請(qǐng)勿將其放在27°C的水浴中，因?yàn)檫@會(huì)使自由基酶迅速無(wú)法使用。使用前放置一次。是的，因?yàn)樘砑拥臄?shù)量很少，因此通常不會(huì)凍結(jié)細(xì)胞。9.在消化過(guò)程中，向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶。個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后，立即搖動(dòng)培養(yǎng)皿蓋住胰酶。一旦充滿，用負(fù)壓吸引多余的胰酶排出，將其加入37度培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化。10.請(qǐng)注意，過(guò)量的胰酶對(duì)細(xì)胞有害，而過(guò)量的EDTA也...