膜片鉗是一種用于研究生物膜電生理特性的技術(shù),它可以在單細(xì)胞或組織切片上記錄膜電位的變化。這種技術(shù)可以用來研究細(xì)胞膜中的離子通道、離子泵以及神經(jīng)元的電活動等。在膜片鉗實驗中,研究者會將單細(xì)胞或組織切片放置在一個稱為膜片電極的微小玻璃管中。這個電極會緊密地貼合在細(xì)胞或組織的表面,形成一個高阻抗的界面,使得研究者可以精確地測量細(xì)胞膜電位的變化。膜片鉗實驗的結(jié)果通常以電流-時間曲線(i-t曲線)的形式呈現(xiàn)。這些曲線可以顯示出在給定的時間內(nèi)通過特定通道的電流強(qiáng)度,從而幫助研究者了解通道的性質(zhì)和功能。除了測量電流外,膜片鉗還可以用來記錄膜電位的變化。這些變化可以反映出細(xì)胞對于各種刺激的反應(yīng),例如神經(jīng)元的興奮或抑制。因此,膜片鉗是一種非常有用的工具,可以幫助研究者深入了解細(xì)胞和組織的生理學(xué)特性??偟膩碚f,膜片鉗是一種強(qiáng)大的電生理技術(shù),可以用來研究細(xì)胞膜中的離子通道和離子泵的功能,以及神經(jīng)元的電活動等。它對于理解細(xì)胞和組織的生理學(xué)特性,以及開發(fā)新的藥物和zhi療策略都具有重要的意義。在青蛙肌細(xì)胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產(chǎn)生了膜片鉗技術(shù)。芬蘭單電極膜片鉗報價
向電極連續(xù)施加1mV、10~50ms的階躍脈沖,電極入水后電阻約為4~6mΩ。此時,在計算機(jī)屏幕顯示框中可以看到測試脈沖產(chǎn)生的電流波形。剛開始的時候增益不要設(shè)置太高,一般可以是1~5mV/PA,避免放大器飽和。由于細(xì)胞外液和電極液離子組成的差異導(dǎo)致液體接界電位,電極剛?cè)胨畷r測試波形的基線不在零線上。因此,需要將保持電壓設(shè)置為0mV,并調(diào)整“電極不平衡控制”,使電極DC電流接近于零。當(dāng)使用微操作器使電極靠近細(xì)胞時,當(dāng)電極前緣接觸細(xì)胞膜時,密封電阻指標(biāo)Rm會上升,當(dāng)電極輕微下壓時,Rm指標(biāo)會進(jìn)一步上升。當(dāng)通過細(xì)塑料管對電極施加輕微負(fù)壓,且細(xì)胞膜特性良好時,Rm一般會在1min內(nèi)迅速上升,直至形成Gω級高阻密封。一般在Rm達(dá)到100MΩ左右時,在電極前端施加一個輕微的負(fù)電壓(-30~-30~-10mV),有利于gω密封的形成。此時的現(xiàn)象是電流波形再次變平,使電極從-40到-90mV超極化,有助于加速形成密封。為了確認(rèn)gωseal的形成,可以提高放大器的增益,因此可以觀察到除了脈沖電壓開始和結(jié)束時的容性脈沖超前電流外,電流波形仍然是平坦的。芬蘭細(xì)胞膜片鉗參數(shù)想要深入了解離子通道?膜片鉗技術(shù)是您不可或缺的研究工具!
把膜電位鉗位電壓調(diào)到-80--100mV,再用鉗位放大器的控制鍵把全細(xì)胞瞬態(tài)充電電流調(diào)定至零位(EPC-10的控制鍵稱為C-slow和C-series;Axopatch200標(biāo)為全細(xì)胞電容和系列電阻)。寫下細(xì)胞的電容值Cc和未補(bǔ)整的系列電阻值Rs,用于消除全細(xì)胞瞬態(tài)電流,計算鉗位的固定時間(即RsCc),然啟根據(jù)歐姆定律從測定脈沖電流的振幅算出細(xì)胞的電阻RC。緩慢調(diào)節(jié)Rs旋鈕注意測定脈沖反應(yīng)的變化,逐漸增加補(bǔ)整的比例。如果RS補(bǔ)整非常接近振蕩的閾值,RS或Cc的微細(xì)變化都會達(dá)到震蕩的閾值,產(chǎn)生電壓的振蕩而使細(xì)胞受損。因此應(yīng)當(dāng)在RS補(bǔ)整水平寫不穩(wěn)定閾值之間留有10%-20%的余地為安全。準(zhǔn)備資料收集和脈沖序列的測定。
一、記錄設(shè)備首先,盡可能完善膜片鉗記錄設(shè)備是實驗前的重要步驟,如用模型細(xì)胞測定電子設(shè)備、安裝并測試應(yīng)用軟件、調(diào)節(jié)光學(xué)顯微鏡、檢驗防震工作臺等。二、微電極的制備膜片鉗電極是用外徑為1-2mm的毛細(xì)玻璃管拉制成的。標(biāo)準(zhǔn)的毛細(xì)玻璃管(外經(jīng)1.5mm,管壁厚0.3mm)適合于制作單通道記錄的微電極,而全細(xì)胞記錄則應(yīng)選管壁較?。?.16mm)的毛細(xì)玻璃管,這樣可以使電極阻抗較低。三、封接(Sealing)技術(shù)封接(seal)是膜片鉗記錄的關(guān)鍵步驟之一。封接不好噪聲太大必然影響細(xì)胞膜電信號的記錄,一般要求封接阻抗至少20GΩ才可進(jìn)行常規(guī)記錄。為了形成良好封接必須保持清潔的溶液、良好的視野以及適當(dāng)?shù)碾姌O鍍膜。為了獲得較好的"千兆歐封接",細(xì)胞表面必須裸露以便微電極前列能接觸細(xì)胞,細(xì)胞的大小也是成功記錄的個因素,一般選擇10-20um的細(xì)胞比較理想。細(xì)胞膜由脂類雙分子層和和蛋白質(zhì)構(gòu)成。
電壓鉗技術(shù),是20世紀(jì)初由Cole發(fā)明,Hodgkin和Huxley完善,其設(shè)計的主要目的是為了證明動作電位的產(chǎn)生機(jī)制,即動作電位的峰電位是由于膜對鈉的通透性發(fā)生了一過性的增大過程。但當(dāng)時沒有直接測定膜通透性的方法,于是就用膜對某種離子的電導(dǎo)來**該種離子的通透性,膜電導(dǎo)測定的依據(jù)是電學(xué)中的歐姆定律,如膜的Na電導(dǎo)GNa與電化學(xué)驅(qū)動力(Em-ENa)和膜電流INa的關(guān)系GNa=INa/(Em-ENa).因此可通過測量膜電流,再利用歐姆定律來計算膜電導(dǎo),但是,利用膜電流來計算膜電導(dǎo)時,記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變,否則膜電流的變化就不能**膜電導(dǎo)的變化。這一條件是利用電壓鉗技術(shù)實現(xiàn)的。下張幻燈中的右邊兩張圖是Hodgkin和Huxley在半個世紀(jì)以前利用電壓鉗記錄的搶烏賊的動作電位和動作電位過程中的膜電流的變化圖,他們的實驗***證明參與動作電位的離子流由Na,k,漏(Cl)三種成分組成。并對這些離子流進(jìn)行了定量分析。這一技術(shù)對闡明動作電位的本質(zhì)和離子通道的的研究做出了極大的貢獻(xiàn)。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊,7*34小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗通常用于實驗室、制造業(yè)和電子工業(yè)等領(lǐng)域,用于夾持薄膜、塑料薄膜、金屬箔等材料。日本單通道膜片鉗蛋白質(zhì)分子水平
膜片鉗記錄技術(shù)與較早的單電極電壓鉗位相比進(jìn)步了很多,尤其在單離子通道鉗位記錄方面。芬蘭單電極膜片鉗報價
80年代初發(fā)展起來的膜片鉗技術(shù)(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學(xué)特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術(shù)的興起與應(yīng)用,使人們不僅對生物體的電現(xiàn)象和其他生命現(xiàn)象更進(jìn)一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認(rèn)識也不斷的更新,同時還形成了許多病因?qū)W與藥理學(xué)方面的新觀點。膜片鉗技術(shù)是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(genecloning)并架齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動力。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務(wù)于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結(jié)果,專業(yè)團(tuán)隊,7*27小時隨時人工在線咨詢.芬蘭單電極膜片鉗報價