湖南神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑

三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響：研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如，四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1；COS7細胞是T3P1和T1P1；A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響：脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu)，但在所有使用的細胞系中，特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響：對于某些細胞，血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高，而在Caco-2細胞的轉(zhuǎn)染中，血清在本實驗室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率19。細胞傳代次數(shù)：Caco-2細胞在2-5次細胞傳代時轉(zhuǎn)染效率比較高9。綜上所述，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細胞的影響存在多方面的差異，包括轉(zhuǎn)染效率、影響因素以及脂質(zhì)體組成等。在進行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗時，需要根據(jù)不同的細胞類型優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件，以獲得比較好的轉(zhuǎn)染效果。PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長超過20個殘基時，它與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。湖南神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑

在核酸遞送中的應(yīng)用核酸***可以通過基因增強、基因抑制和基因組編輯實現(xiàn)持久甚至***的效果。然而，裸核酸分子難以進入細胞，陽離子聚合物作為非病毒核酸遞送系統(tǒng)，其分子上帶有正電荷基團，可濃縮核酸分子形成納米顆粒，幫助核酸跨越屏障在細胞中表達蛋白質(zhì)或抑制目標基因表達。陽離子聚合物易于合成、修飾和結(jié)構(gòu)控制，是一類有前途的核酸遞送系統(tǒng)7。在顱內(nèi)遞送合成mRNA中的應(yīng)用在本研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑建立了顱內(nèi)遞送合成mRNA的小鼠模型。將合成的熒光素酶mRNAs用兩種不同的轉(zhuǎn)染試劑包裹后定點微注射到大腦中，通過小動物成像系統(tǒng)監(jiān)測遞送的mRNA的表達狀態(tài)，并通過行為和血液生化測量評估可能的試劑誘導(dǎo)的生物毒性。該模型表明，合成mRNA可以用常用的轉(zhuǎn)染試劑成功遞送到大腦中，且沒有可測量的毒性，外源性mRNA的表達在顱內(nèi)注射后在合理的時間內(nèi)持續(xù)存在。合成修飾的TRAILmRNA也被用作***應(yīng)用的例子9。山東fugene轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在多種差異。以下將詳細闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中轉(zhuǎn)染機制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑：機制概述：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成，其轉(zhuǎn)染機制主要是通過與帶負電的RNA分子結(jié)合，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物。這個復(fù)合物能夠與細胞膜相互作用，通過內(nèi)吞作用或膜融合等方式進入細胞。進入細胞后，脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子，使其能夠在細胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn)：在腎*細胞系786-O和ACHN中，目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用，但可以推測其可能通過類似的機制進入細胞，影響細胞內(nèi)的基因表達和細胞生長。例如，微小RNA-1180（miR-1180）轉(zhuǎn)染對腎*細胞生長產(chǎn)生影響，雖然未明確指出轉(zhuǎn)染試劑類型，但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可能在類似的研究中發(fā)揮作用1。在MEF細胞、3T3細胞、Hela細胞及MCF-7細胞中，MessageMax脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入細胞，并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位。這表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在不同類型的細胞中能夠有效地將RNA分子轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)，并實現(xiàn)特定蛋白的表達。

靶向特定基因座提高穩(wěn)定轉(zhuǎn)染效率：在布魯氏錐蟲中，利用RNAi的構(gòu)建體和（GFP）標記的蛋白的表達，靶向（hyg）標記的核糖體RNA（RRNA）基因座，可以規(guī)避位置效應(yīng)并提高靶向效率。該系統(tǒng)還利用新的誘導(dǎo)型RRNA啟動子來驅(qū)動T7RNA聚合酶（T7RNAP）轉(zhuǎn)錄，然后從誘導(dǎo)型T7啟動子驅(qū)動表達，可減輕當(dāng)前表達系統(tǒng)的一些問題9。綜上所述，提高RNA轉(zhuǎn)染效率的策略包括選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑、利用魚精蛋白、優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法、采用RNA電穿孔、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法以及靶向特定基因座等。這些策略可以根據(jù)不同的實驗需求和細胞類型進行選擇和組合，以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，為RNA研究和應(yīng)用提供有力支持。脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進入細胞。

在人類多能干細胞衍生的心肌細胞（HPSC-CMs）中的應(yīng)用低轉(zhuǎn)染效率是實現(xiàn)HPSC-CMs在疾病建模和心臟修復(fù)研究中廣泛應(yīng)用的障礙。通過優(yōu)化四個基本參數(shù)，即血清補充劑、復(fù)制和轉(zhuǎn)染之間的時間、試劑與DNA比以及細胞密度，使用Promega的Viafect?轉(zhuǎn)染試劑能夠?qū)PSC-CMs轉(zhuǎn)染至約95%的效率28。盡管活力有所降低，但轉(zhuǎn)染后的HPSC-CMs仍保持了高純度和結(jié)構(gòu)完整性，確保了至少14天的轉(zhuǎn)染基因持續(xù)表達，為心臟相關(guān)疾病的研究開辟了新機遇。在C2C12細胞中的應(yīng)用C2C12細胞在肌肉領(lǐng)域***使用，但它們和原代成肌細胞一樣難以轉(zhuǎn)染，影響了下游實驗。雖然自2015年以來超過95%的使用C2C12細胞的報告使用了一種金標準轉(zhuǎn)染劑（如Lipofectamine®），但有研究表明其效率低于30%。通過比較五種商業(yè)試劑（Lipofectamine®3000、Viafect?、Fugene®HD、C2C12CellAvalanche®和JetOPTIMUS®）在C2C12細胞中的轉(zhuǎn)染效率，發(fā)現(xiàn)通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細胞密度，所有試劑都能達到超過60%的轉(zhuǎn)染效率，且對細胞生長和活力影響有限。這些試劑還能在C2C12細胞中轉(zhuǎn)染后高效生成GFP陽性的肌管，但在轉(zhuǎn)染siRNA和對原代肌肉細胞的轉(zhuǎn)染中表現(xiàn)出較低效率和較高毒性3。但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的技術(shù)也至關(guān)重要。南京轉(zhuǎn)染試劑靠譜

Severino et al.進行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。湖南神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑

優(yōu)化電轉(zhuǎn)方法篩選**適電壓和脈沖時間：不同細胞種類電轉(zhuǎn)所需的**適電壓和脈沖時間不同。例如，人成纖維細胞電轉(zhuǎn)modRNA的**適電壓為440V，**適脈沖時間為30ms；Hela、293T、3T3細胞電轉(zhuǎn)**適電壓分別為425V、400V、440V，**適脈沖時間均為30ms；人/兔外周血來源的懸浮的單個核細胞的**適電壓分別為840V和860V，**適脈沖時間均為20ms。通過篩選**適電壓和脈沖時間，可以提高RNA轉(zhuǎn)染效率，同時證明了電轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)染modRNA進入細胞的可行性，且可同時將兩種modRNA導(dǎo)入同一個細胞內(nèi)6。RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達和80％以上的活細胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細胞進行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細胞。此外，基因表達迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細胞未觀察到不良影響7。湖南神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑