美國(guó)精子分析W.H.O 6

男科實(shí)驗(yàn)室中通常所指的質(zhì)量包含三個(gè)方面：實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量、醫(yī)生處置的質(zhì)量以及結(jié)果的質(zhì)量［3］。1．實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量與**分析有關(guān)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量主要是工作人員的素質(zhì)和所采用儀器的質(zhì)量。工作人員應(yīng)經(jīng)過(guò)特殊的培訓(xùn)?儀器必須處于正常狀態(tài)、確保準(zhǔn)確的結(jié)果?操作應(yīng)符合規(guī)程［4］。CASA系統(tǒng)本身的質(zhì)量難于評(píng)定。硬件?如顯微鏡、影像攝影機(jī)和計(jì)算機(jī)經(jīng)檢查便可確定其可靠性。但軟件并非如此?軟件中存在不確定的因素?算法是軟件中**重要的部分?通常制造者保守這些秘密；因此?有關(guān)軟件的數(shù)學(xué)上、信息性的、統(tǒng)計(jì)學(xué)的或生物測(cè)量方面的檢查實(shí)驗(yàn)室難于進(jìn)行。全自動(dòng)精子分析儀極大提高臨床檢驗(yàn)水平，廣泛應(yīng)用于泌尿科，男性科以及計(jì)劃生育、優(yōu)生優(yōu)育研究等。美國(guó)精子分析W.H.O 6

美國(guó)HamiltonThorne的TOXIVOS精子分析儀已經(jīng)被FDA和國(guó)內(nèi)外毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室所使用。本試驗(yàn)研究目的對(duì)精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在大鼠附睪精子計(jì)數(shù)結(jié)果的比較驗(yàn)證。方法選取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,對(duì)三批次雄鼠的精子計(jì)數(shù)進(jìn)行比較。健康雄鼠通過(guò)戊巴比妥鈉麻醉實(shí)施安樂(lè)死后,取左側(cè)附睪尾稱(chēng)重,將附睪尾部放入37℃預(yù)熱的含有M199培養(yǎng)液平皿中,剪碎附睪尾,放入培養(yǎng)箱中37℃孵育5min,然后吸取1份精子懸液,用M199培養(yǎng)液進(jìn)行一定倍數(shù)的稀釋,混勻后,取1滴稀釋液,滴入精子分析儀**載玻片上,將載玻片放入TOXIVOS精子分析儀載物臺(tái),進(jìn)行精子計(jì)數(shù),同時(shí)吸取稀釋后的精子懸液滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi),通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行計(jì)數(shù),比較兩種計(jì)數(shù)方法的差異性。結(jié)果***批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的精子計(jì)數(shù)結(jié)果分別為165.9±91.7,140.0±59.6。三個(gè)批次的精子分析儀和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的精子計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論精子分析儀是一種方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理學(xué)研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。廣州瀕危物種精子分析VAP所有操作人員都應(yīng)接受規(guī)范的CASA分析儀使用培訓(xùn)，嚴(yán)格按照使用指南進(jìn)行操作?。

CASA系統(tǒng)雖然有諸多優(yōu)點(diǎn)，但是很多因素都會(huì)影響到CASA儀器的使用及準(zhǔn)確性。CASA系統(tǒng)進(jìn)行**分析應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：3.1標(biāo)本的采集與制作（1）采集前禁欲2?7天，禁欲時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、過(guò)短對(duì)**質(zhì)量都有一定影響。（2）容器要清潔。（3）特殊情況下，*可使用專(zhuān)門(mén)為采集**設(shè)計(jì)的無(wú)毒性避孕套，普通的乳膠避孕套因含有損害精子活力的物質(zhì)不可使用。（4）注意保溫（20?37℃），并于30分鐘內(nèi)送檢驗(yàn)科。（5）標(biāo)本置于37℃水浴.精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)具有溫度敏感性，因此要求計(jì)數(shù)池應(yīng)于分析儀恒溫板上預(yù)溫。（6）密切注意**液化的情況，確保液化時(shí)間準(zhǔn)確，因**樣本隨放置時(shí)間的延長(zhǎng)，精子活動(dòng)力及活動(dòng)率有減少的趨勢(shì)。標(biāo)本液化后取混勻樣本**1滴滴在樣品池中間，然后進(jìn)行分析。（7）檢測(cè)精子活動(dòng)力，標(biāo)本密度應(yīng)控制在2×106/ml到50×106/ml之間。具有高密度（如高于50×106/ml）精子的標(biāo)本，通常會(huì)增加碰撞的頻率，并可能由此出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。在這種情況下，建議用同源精漿稀釋標(biāo)本。

七、精子形態(tài)檢查[正常參考值]畸形精子：＜10%-15%；凝集精子：＜10%；未成熟精細(xì)胞：＜1%。[臨床意義]1．精索靜脈曲張病人的畸形精子增多，提示精子在不成熟時(shí)已進(jìn)入精液，或靜脈回流不暢造成陰囊內(nèi)溫度過(guò)高和睪丸組織缺氧，或血液帶有毒性代謝產(chǎn)物從腎或腎上腺靜脈逆流至睪丸，上述原因均有損于精子形態(tài)。2.精液中凝集精子增多，提示生殖道***或免疫功能異常。3.睪丸曲細(xì)精管生精功能受到藥物或其他因素影響或傷害時(shí)，精液中可出現(xiàn)較多病理性未成熟精細(xì)胞。八、精液細(xì)胞檢查[正常參考值]白細(xì)胞(WBC)：＜5個(gè)/HP(高倍鏡視野)；紅細(xì)胞(RBC)：0-偶見(jiàn)/HP。[臨床意義]1．精液中白細(xì)胞增多，常見(jiàn)于精囊炎、前列腺炎及結(jié)核等。2．精液中紅細(xì)胞增多，常見(jiàn)于精囊結(jié)核、前列腺*等。3.精液中若查到*細(xì)胞，對(duì)生殖系*有診斷意義。Hamilton Thorne精子分析儀具有高度的可靠性和穩(wěn)定性，能夠長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定運(yùn)行，保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

1.基本檢查：是確定精液變量穩(wěn)定的常規(guī)方法，不僅是男科實(shí)驗(yàn)室，任何開(kāi)展精液檢查的實(shí)驗(yàn)室都能遵循。精子計(jì)數(shù)依然推薦使用改良Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的方法，但計(jì)數(shù)的方法有了改變。明確推薦了伊紅笨胺黑染色法作為精子存活率診斷的優(yōu)先方法，伊紅染色和低滲腫脹實(shí)驗(yàn)只作為備選方法。刪減了參考值下限的描述。對(duì)于精子活動(dòng)率大于40%的樣本沒(méi)有必要做存活率評(píng)估。與第5版手冊(cè)中淡粉色判讀為活精子不同，明確了只有精子頭為白色的精子為活精子、淡粉色為死精子。臨床數(shù)據(jù)表明，鑒別快速前向運(yùn)動(dòng)精子非常重要。因此，關(guān)于精子活力分級(jí)，第6版手冊(cè)建議恢復(fù)到快速前向運(yùn)動(dòng)、慢速前向運(yùn)動(dòng)、非前向運(yùn)動(dòng)和不活動(dòng)4個(gè)活力級(jí)別，但精子活動(dòng)率的參考值范圍卻依然是按前向運(yùn)動(dòng)(PR)、非前向運(yùn)動(dòng)(NP)、不活動(dòng)(IM)3個(gè)活力級(jí)別計(jì)算。第6版手冊(cè)強(qiáng)調(diào)，精子形態(tài)學(xué)評(píng)估的價(jià)值不僅在于其可用于判斷自然妊娠和輔助生殖技術(shù)(ART)結(jié)局的預(yù)后，還可以為男性生殖***包括睪丸和附睪功能判斷提供更多診斷信息。對(duì)于3%和5%的精子“正?！毙螒B(tài)率的判斷，則要求必須由訓(xùn)練有素的人員評(píng)估1500個(gè)精子來(lái)完成；對(duì)于無(wú)尾精子(只有頭部的精子)超過(guò)總精子數(shù)20%的精液，應(yīng)單獨(dú)計(jì)算并在報(bào)告中注明；精子分析系統(tǒng)較傳統(tǒng)的分析法比較，具有速度快、量比性好、準(zhǔn)確性高、為臨床和科研提供客觀(guān)的檢測(cè)依據(jù)。濃度精子分析精確溫度控制

計(jì)算機(jī)輔助精子分析（computer- assisted sperm analysis）是2014年公布的泌尿外科學(xué)名詞。美國(guó)精子分析W.H.O 6

通過(guò)結(jié)果的生物學(xué)意義對(duì)結(jié)果質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估?當(dāng)所有具生物學(xué)意義的參數(shù)在測(cè)試中表現(xiàn)出較小的可變性時(shí)則方法學(xué)可變性亦較低方法學(xué)可變性低則結(jié)果質(zhì)量就高。CASA系統(tǒng)獲得的數(shù)值與直觀(guān)評(píng)估獲得的數(shù)值進(jìn)行分析和比較在精子數(shù)量和綜合運(yùn)動(dòng)性上具有較好的相關(guān)性而·131·中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志2002第10卷第6期DOI:10．13404／j．cnki．cjbhh．2002．06．091在前向運(yùn)動(dòng)精子百分率上的相關(guān)性較低］。Holt等報(bào)道了在常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件下采用五種不同的CASA系統(tǒng)對(duì)**參數(shù)值進(jìn)行比較，其結(jié)果為：采用同一個(gè)測(cè)定池由不同的操作者測(cè)定**參數(shù)；變異系數(shù)（CV）是29％?活動(dòng)精子比率的CV為24％?平均路徑速度（VAP）的CV為43?85％。作者們指出該分析結(jié)果不應(yīng)看作是不同CASA系統(tǒng)間的工作情況的比較?實(shí)際上它揭示了操作者的錯(cuò)誤是差異的主要來(lái)源。目前有待于尋找進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)估CASA變量的結(jié)果質(zhì)量。精子***的生物學(xué)功能是使卵細(xì)胞授精?因此用夫婦中的授精結(jié)果來(lái)考察精子運(yùn)動(dòng)性是合理的?只有在該基礎(chǔ)上能夠確定活動(dòng)性參數(shù)的重要性。輔助生殖技術(shù)（授精I(xiàn)VF）的發(fā)展使檢測(cè)精子質(zhì)量與各參數(shù)間的關(guān)系的比較成為可能；同樣可以驗(yàn)證CASA測(cè)定結(jié)果與精子真實(shí)質(zhì)量間的相關(guān)性有利于CASA結(jié)果質(zhì)量的提高。美國(guó)精子分析W.H.O 6