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外泌體提取之后利用電鏡來分析其大小和形態(tài),利用流式細(xì)胞儀來分析細(xì)胞表面標(biāo)記,通過Western blot和ELISA等方法對蛋白進(jìn)行分析,或通過qPCR和新一代測序(NGS)來分析RNA。調(diào)查發(fā)現(xiàn),在分離exosome時,約有56%的人采用超速離心法,說明這種方法仍是目前的金標(biāo)準(zhǔn)方法。不過這種方法缺點也不少:耗時耗力,往往需要8-30個小時;每次比較多只能處理6個樣品;需要大量的起始材料;產(chǎn)量不高。商業(yè)化的exosome提取試劑盒已經(jīng)上市,更為簡單省事。外泌體那些事兒,南京英瀚斯生物。重慶值得信賴的外泌體提取
外泌體的分離對于理解它們的作用機制和它們在生物醫(yī)學(xué)科學(xué)中的應(yīng)用是至關(guān)重要的。一些實驗室已經(jīng)成功地利用諸如超離心法、超濾法、層析法、基于聚合物的沉淀法和抗體偶聯(lián)磁珠的親和捕獲等技術(shù)分離外泌體。已有研究表明,密度梯度離心法可以分離出比較純凈的外泌體。1983年外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而比較近幾年,人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣。比較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用。山西比較好的外泌體測序外泌體存在于人類或動物的各種體液中。
外泌體鑒定,可以用和表面抗原對應(yīng)的抗體進(jìn)行免疫印跡(WB)、透射電子顯微鏡(TEM)、納米粒徑分析(如NanoSight LM10)等來驗證。前面也說了,ISEV建議用表面蛋白來界定所提取的細(xì)胞外囊泡,所以用CD63來做WB或ELISA是必不可少的了。使用Wako的PS Capture? Exosome ELISA Kit (Streptavidin HRP)(產(chǎn)品編號298-80601),既能鑒定外泌體的CD63信號,又能進(jìn)行定量、定性分析,一舉兩得!南京英瀚斯可以做外泌體鑒定。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨特的優(yōu)勢,表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,使其可以穿透許多生物膜,
外泌體的生成,微泡是由質(zhì)膜的出芽形成的,膜雙層通過磷脂的不對稱分布來維持脂質(zhì)的“多面性”。外層富含磷脂酰膽堿和鞘磷脂,而內(nèi)層主要由磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺形成。然而,胞質(zhì)Ca2+的內(nèi)流可以破壞這種不對稱性,導(dǎo)致磷脂跨膜雙層的重新分配,促進(jìn)膜起泡。依賴Ca2+的蛋白水解同時降解膜相關(guān)的細(xì)胞骨架,促進(jìn)出芽過程。在外泌體形成過程中,首先,MVE(多囊體)向內(nèi)芽形成小泡,內(nèi)含來自細(xì)胞質(zhì)的貨物(蛋白質(zhì)、mRNA和miRNAs)。然后,MVE要么與細(xì)胞膜融合釋放外泌體(內(nèi)囊泡),要么與溶酶體融合降解MVE含量。到達(dá)目的地后,外泌體通過內(nèi)吞途徑或與靶細(xì)胞膜融合,將其內(nèi)容物釋放到細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞的膜的囊泡也可以直接從細(xì)胞膜上萌發(fā),攜帶活性蛋白、RNA和其他化合物。外泌體檢測服務(wù)-實驗外包檢測。
外泌體在**、神經(jīng)退行性疾病、肝臟和腎臟疾病以及多種心肺疾病的預(yù)后和診斷中發(fā)揮著重要作用,比較近的研究表明,外泌體也是一種新型的***試劑。來自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體已在各種疾病模型中進(jìn)行了測試,如呼吸系統(tǒng)、心血管、神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉骨骼、肝臟、胃腸道、皮膚和腎臟疾病。MSC來源的外泌體通過抑制促炎細(xì)胞因子的表達(dá)來發(fā)揮***作用,并通過增強細(xì)胞外基質(zhì)重塑來促進(jìn)組織再生,同樣,由誘導(dǎo)的多能干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞和心臟祖細(xì)胞分泌的外泌體具有類似于MCS來源的外泌體的***效果。南京英瀚斯,專業(yè)的外泌體提取、鑒定服務(wù)。重慶靠譜的外泌體實驗
外泌體提取,超離法是比較常用的外泌體純化手段。重慶值得信賴的外泌體提取
外泌體和微囊泡的區(qū)別在于其生成的方式不同。從晚期內(nèi)體來源產(chǎn)生的細(xì)胞外囊泡稱為外泌體,從細(xì)胞膜直接出芽產(chǎn)生的細(xì)胞外囊泡稱為微囊泡。二者的大小也有所不同,外泌體的粒子直徑在40~100nm范圍,微囊泡的粒子直徑在100~1,000nm,但有報道發(fā)現(xiàn)也存在直徑較小的微囊泡,所以無法明確從粒子大小來區(qū)分二者。外泌體是健康細(xì)胞和*細(xì)胞均可釋放的小膜泡,***存在于人體的血液、乳汁、尿液以及唾液等多種體液中,其種類和數(shù)量與機體的生理狀態(tài)息息相關(guān)。重慶值得信賴的外泌體提取