免疫沉淀(又叫免疫沉淀(IP)) 免疫沉淀是很有價(jià)值的研究工具,目的是研究某一特定蛋白的關(guān)鍵信息,包括:小規(guī)模蛋白純化用于功能研究,N-端序列分析,蛋白-蛋白相互作用的研究,細(xì)胞或組織中蛋白相對(duì)豐度和分布的測(cè)定。免疫沉淀分析法的成功取決于兩個(gè)主要因素:原始樣品中抗原的豐度和抗體對(duì)該抗原的親和力(一般需要108 M-1或以上的親和力)。在開(kāi)始免疫沉淀之前,確保特定的步驟有適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)對(duì)照。對(duì)照抗體在性質(zhì)上盡可能與該特異性抗體類(lèi)似。上海益啟生物的科研抗體銷(xiāo)售電話。黃浦區(qū)Calbiochem抗體抗體銷(xiāo)售
信號(hào)弱 信號(hào)高 本底較高 準(zhǔn)確度較低(一偶然誤差) 計(jì)算的教據(jù)過(guò)高或過(guò)任《一系統(tǒng)誤差,數(shù)據(jù)與"標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)"的偏差) 可能的原因: 實(shí)驗(yàn)試劑使用錯(cuò)誤實(shí)驗(yàn)試劑損壞 所用實(shí)驗(yàn)試劑稀釋度錯(cuò)誤儀器的過(guò)濾器選擇錯(cuò)誤(波長(zhǎng))前育時(shí)間過(guò)短,溫度過(guò)低 試劑溫度不正確 在較高濃度時(shí),疊氮化鈉、燕基乙身或DTT可能干擾過(guò)氧化物恃活性。所用實(shí)驗(yàn)試劑稀釋度錯(cuò)誤醇育時(shí)間過(guò)長(zhǎng),溫度過(guò)高 洗洛不足洗得污染 試劑或小瓶/試管受到以前實(shí)驗(yàn)的污染 所用實(shí)驗(yàn)試劑(抗體和等結(jié)合物)稀釋度錯(cuò)誤黃浦區(qū)MYC抗體抗體一級(jí)代理上海益啟訂購(gòu)抗體的服務(wù)電話是多少?
· 間接檢測(cè)法 在間接檢測(cè)法中,用純化抗體進(jìn)行解育和目標(biāo)抗原結(jié)合,隨后采用熒光標(biāo)記二抗,形成一抗-焚光二抗復(fù)合物,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)抗原的檢測(cè)。·生物素化檢測(cè)法 第三種方法即生物素化檢測(cè)法;親和素是細(xì)菌源蛋白,由于它們與生物素的天然親和力,故如此命名。生物素-鎮(zhèn)需親和素復(fù)合物有時(shí)叫做molecular velcro",因其作為一種結(jié)合兩種分子的研究工具已***用于免疫檢測(cè)、蛋白組學(xué)、親和純化以及核酸-蛋白相互作用的分析中。市場(chǎng)上有多種生物素化一抗或二抗可供選擇;通過(guò)隨后對(duì)熒光基團(tuán)結(jié)合鏈霉親和素的解育進(jìn)行流式細(xì)胞檢測(cè)。可能會(huì)實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大,因?yàn)樯锼鼐哂兴膫€(gè)鏈霉親和素結(jié)合位點(diǎn),導(dǎo)致熒光信號(hào)可能增加四倍。
使用該分析法時(shí)的"夾心"產(chǎn)生過(guò)程∶ 將一種純化的、靶標(biāo)特異性抗體(捕獲"抗體)結(jié)合在因定相上一通常闊著在平板孔約底叔加入樣品(可能含有未知量的抗原),使其與捕獲抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。通過(guò)洗滌除去未結(jié)合的樣品。 加入一種標(biāo)記抗體(檢測(cè)抗體),使其與抗原結(jié)合。在雙抗夾心ELISA中,捕獲抗體和檢測(cè)抗體的選擇十分重要,直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、特異性和靈敏度。 夾心法ELISA和競(jìng)爭(zhēng)性ELISA之間的差別 Troubleshooting 問(wèn)題:無(wú)信號(hào)益啟生物是Sigma抗體的代理商。
在本節(jié)中,將討論目前仍在應(yīng)用中的主要免疫技術(shù)理論和實(shí)驗(yàn)。 免疫學(xué)研究時(shí)間軸 1900.Ehrlich提出抗體形成理論 1938.Marrack提出抗原-抗體結(jié)合假說(shuō) 1962.Edelman & Porter解析抗體分子結(jié)構(gòu) 1975.Kohler & Milstein開(kāi)發(fā)單克隆抗體產(chǎn)品 1986.采用基因工程生產(chǎn)乙肝疫苗 1900.Landsteiner & Levine使用天然抗血清識(shí)別ABO血型 1900.Nuttall, Wasserman &Schutze 采用沉淀素試驗(yàn)區(qū)分人乳、牛乳和山羊乳 1900-01.Uhlenhuth 關(guān)于雞蛋蛋白分型的工作,在醫(yī)學(xué)工作中用沉淀素反應(yīng)進(jìn)行人血液染色鋪平了道路 1942.Coons等發(fā)表IHC關(guān)鍵研究。抗體是采用FITC標(biāo)記的 1942.Coons等發(fā)表IHC關(guān)鍵研究。抗體是采用FITC標(biāo)記的找Abcam抗體哪家靠譜?黃浦區(qū)Calbiochem抗體抗體銷(xiāo)售
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酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 是結(jié)合了抗體的特異性和簡(jiǎn)單髓分析法的高靈敏度蛋白檢測(cè)方法。通過(guò)采用抗體-抗原反應(yīng),ELISA可以提供抗原或抗體濃度測(cè)量。有兩種常用的ELISA形式∶雙抗夫心EUSA和競(jìng)爭(zhēng)性ELISA。圖解和描述如下B。?實(shí)驗(yàn)中**常用的是雙抗夾心ELUSA,它用于測(cè)定未知樣品中的抗原濃度,是**有用的免疫分析法之一。夾心ELISA 快速且準(zhǔn)確;并且如果提供純化的抗原標(biāo)準(zhǔn)品,該分析法可用于生成劑量-反應(yīng)曲線,用于測(cè)定未知樣品中抗源的***量。黃浦區(qū)Calbiochem抗體抗體銷(xiāo)售