ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中鹽核酸酶,2021年推出對(duì)應(yīng)的M-SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中M-SAN HQ中鹽核酸酶的殘留含量,特異性的anti-M-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在孔板上,辣根過(guò)氧化酶HRP標(biāo)記anti-M-SAN作為檢測(cè)抗體,TMB是檢測(cè)反應(yīng)底物。該試劑盒特異識(shí)別M-SAN HQ中鹽核酸酶,對(duì)其它核酸酶沒(méi)有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.12-7.5ng/ml;12*8strips的設(shè)計(jì)規(guī)格,使用靈活,更能降低使用成本。M-SAN HQ中鹽核酸酶不含動(dòng)物源成份,無(wú)蛋白酶活性;江西培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950
一般來(lái)說(shuō),生物生產(chǎn)工藝用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注冊(cè)商標(biāo))為主,能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀)的DNA和RNA。該酶來(lái)自于大自然界普遍存在的S.Marcescen,通過(guò)E.coli發(fā)酵生產(chǎn)得到。該酶的適宜反應(yīng)條件是低鹽濃度范圍(<100mM鹽濃度),且酶活隨著鹽濃度上升而下降,在300mM鹽濃度時(shí)酶活幾乎喪失。對(duì)于細(xì)胞基因藥物常用的兩種病毒載體LV和AAV,LV由于含有脂包膜結(jié)構(gòu)一般都在生理鹽條件下存在,而AAV在高鹽條件下不易團(tuán)聚、更穩(wěn)定。而在生理鹽濃度及更高濃度條件下,Benzonase活性受到抑制。遼寧M-SAN HQ中鹽核酸酶70950-160M-SAN HQ中鹽核酸酶更適合細(xì)胞基因drug(如AAV、LVV、RV及OV等)的生產(chǎn)。
細(xì)胞基因藥物領(lǐng)域的進(jìn)展使得對(duì)高質(zhì)量基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的需求急劇增加,包括高質(zhì)量慢病毒載體(LV)的大規(guī)模生產(chǎn)。宿主細(xì)胞DNA殘留(HCD)是一類主要的工藝相關(guān)雜質(zhì),對(duì)下游純化帶來(lái)很大挑戰(zhàn)。根據(jù)相關(guān)法規(guī)要求,需要去除HCD才能達(dá)到臨床級(jí)LV。HCD去除是通過(guò)核酸酶處理聯(lián)合下游工藝(DSP)共同實(shí)現(xiàn)的。文章作者研究了兩款核酸酶M-SAN HQ中鹽核酸酶(ArcticZymes Technologies)和Benzonase(Merck)對(duì)HCD去除效率的差別,其下游工藝包含過(guò)濾澄清及TFF超濾。
宿主細(xì)胞DNA(HCD)殘留以染色質(zhì)形式存在,其中有帶負(fù)電荷的DNA、帶正電荷及疏水區(qū)段的組蛋白,就像膠帶一樣能夠吸附很多物質(zhì),包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白,會(huì)影響蛋白雜質(zhì)(如HCP)等的去除;吸附到色譜填料上,會(huì)降低色譜分離純化效率;吸附到目的病毒顆粒時(shí),會(huì)影響目的產(chǎn)物的穩(wěn)定性,從而降低目的產(chǎn)物的得率。因此,從生產(chǎn)工藝層面來(lái)講,一定要去除HCD,從而能夠簡(jiǎn)化工藝、提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)量。黃山中鹽核酸酶售后服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
在干細(xì)胞醫(yī)治領(lǐng)域, 某些疾病靠單純的細(xì)胞替代并不能取得滿意效果。利用逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒將外源目的基因整合到干細(xì)胞基因組,對(duì)基因功能缺失的遺傳病具有良好療效,但也存在一定致瘤風(fēng)險(xiǎn)。相比之下,CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)能夠精確實(shí)現(xiàn)基因敲入、敲除及堿基修復(fù)。因此, 采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行基因改造,不僅能夠增加干細(xì)胞醫(yī)治的疾病范圍,也能更大程度地保證療效的安全性。目前,CRISPR/Cas9在干細(xì)胞醫(yī)治領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用,同時(shí)更多由CRISPR/Cas9編輯的干細(xì)胞藥物正在開(kāi)發(fā)中。生理鹽濃度下,M-SAN HQ中鹽核酸酶性能優(yōu)于常用核酸酶,對(duì)HCD的去除有些本質(zhì)區(qū)別。海南ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160
M-SAN HQ ELISA kit檢測(cè)產(chǎn)品靈敏度高,定量范圍為0.12-7.5ng/ml。江西培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950
倫敦大學(xué)學(xué)院(UCL)的工藝開(kāi)發(fā)團(tuán)隊(duì),在細(xì)胞藥物Car-T涉及的慢病毒(Lentivirus,LV)生產(chǎn)過(guò)程中,比較了Benzonase和M-SAN HQ中鹽核酸酶在酶活、酶切時(shí)間、各階段LV的穩(wěn)定性等方面的表現(xiàn),發(fā)現(xiàn)在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶酶活更高、酶切時(shí)間更短,同時(shí)用納米顆粒分析(NTA)技術(shù)確認(rèn)M-SAN HQ組得到的LV病毒顆粒聚集更少、穩(wěn)定性更高。他們會(huì)繼續(xù)探究HCD是否影響LV的穩(wěn)定性,及對(duì)LV侵染效率和生命周期是否有影響。通過(guò)更多研究,我們探究M-SAN HQ中鹽核酸酶助力LV生產(chǎn)的關(guān)鍵機(jī)制。江西培養(yǎng)基條件中鹽核酸酶70950