有人以豬骨為原料,用蛋白酶的酶解反應(yīng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)制膠工藝,對(duì)骨膠原的酶解反應(yīng)與酶法制膠工藝進(jìn)行了試驗(yàn)研究。結(jié)果表明:以胃蛋白酶對(duì)骨膠原的提取率比較高(),其次是胰蛋白酶(),接下來(lái)是中性蛋白酶(),現(xiàn)在是堿性蛋白酶()。并且通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)對(duì)胃蛋白酶酶解反應(yīng)中各主要影響因素進(jìn)行了優(yōu)化。試驗(yàn)結(jié)果表明,胃蛋白酶提取的比較好條件是,胃蛋白酶的濃度是1%,在,然后在濃度為10%(w/v)的NaCL溶液中鹽析24h,現(xiàn)在骨膠原的回收率為,骨膠原的提取率為。還有人用胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白,分別在水解0、2、6、10、14、18、22、26h時(shí)對(duì)四種不同胃蛋白酶用量(分別為1%、2%、、3%)的試樣取樣檢測(cè),采用一階HILL方程模擬胃蛋白酶提取豬皮膠原蛋白的進(jìn)程以及胃蛋白酶水解速率的衰減過(guò)程,現(xiàn)在得出2%的胃蛋白酶用量和6-7h的水解時(shí)間提取率比較大。還有人用以新鮮豬皮為原料,在50-52℃的條件下用胰酶進(jìn)行水解,在酶用量為5000:1~10000:1,pH值為9,反應(yīng)2-3h,原料:水為1:2的條件下酶解。結(jié)果表明:總蛋白質(zhì)的提取率≥80%。 采用酶法提取膠原蛋白時(shí),必須嚴(yán)格控制提取條件。安徽小分子膠原蛋白固體飲料
由于氨基酸組成和交聯(lián)度等方面的差異,使得水產(chǎn)動(dòng)物尤其是其加工廢棄物——皮、骨、鱗中所含有的豐富的膠原蛋白具有很多牲畜膠原蛋白所沒(méi)有的優(yōu)點(diǎn),另外來(lái)源于海洋動(dòng)物的膠原蛋白在一些方面明顯優(yōu)于陸生動(dòng)物的膠原蛋白,比如具有低抗原性、低過(guò)敏性等特性。因此水產(chǎn)膠原蛋白可能逐步替代陸生動(dòng)物膠原蛋白。膠原蛋白種類較多,常見(jiàn)類型為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。膠原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性,因此在食品、醫(yī)藥、組織工程、化妝品等領(lǐng)域獲得比較廣的應(yīng)用。湖北海鯛魚膠原蛋白粉膠原三肽主要具有以下功能:保濕。
免疫學(xué)分析和研究結(jié)果表明,使用膠原加完全弗氏佐劑,能對(duì)膠原產(chǎn)生多克隆和單克隆抗體。由T細(xì)胞啟動(dòng)的對(duì)膠原蛋白免疫反應(yīng)的證據(jù)是,位于重要組織相容性(H-2)部位上ⅠA或ⅠB亞區(qū)的免疫反應(yīng)基因已被鑒定。膠原蛋白免疫原性的臨床評(píng)價(jià)通常是皮膚過(guò)敏性測(cè)試(細(xì)胞免疫指數(shù),遲發(fā)性Ⅳ型反應(yīng))和由反應(yīng)型抗體的存在(體液免疫指數(shù))來(lái)確定的。實(shí)踐證明,在患者身上進(jìn)行這兩種評(píng)價(jià)是合理的。在治好前,用過(guò)敏劑量的植入性膠原對(duì)患者進(jìn)行皮試,大約3%有潛在的反應(yīng),反復(fù)多次處理的患者,大約1%~2%會(huì)產(chǎn)生遲發(fā)性過(guò)敏性的臨床病狀。典型的癥狀包括局部水腫和紅斑反應(yīng),有的還伴有硬化和瘙癢,持續(xù)時(shí)間4~6個(gè)月,個(gè)別甚至可達(dá)1年以上。
膠原單獨(dú)使用,物理機(jī)械性能差(這幾乎是天然材料共有的弱點(diǎn)),性能單一,且因有親水性強(qiáng),在體內(nèi)易被膠原酶降解等不可避免的弱點(diǎn)限制了它的應(yīng)用。但如將膠原與其它物理、化學(xué)性質(zhì)不同的合成或天然高分子共混,組成一種多相固體材料,在性能上膠原與其它高分子互相補(bǔ)充,膠原基“復(fù)合材料”的概念由此產(chǎn)生。已見(jiàn)報(bào)道的與膠原共混的合成高分子有不可生物降解的聚甲基烯酸酯及丁烯酸酯、聚氨酯、聚酰胺和可生物降解的聚乙烯醇、聚乳酸、聚谷氨酸、聚乙醇酸等,20世紀(jì)80~90年代初較有代表性的是聚甲基丙烯酸羥乙酯(PHEMA)和聚乙烯醇與膠原共混,其報(bào)道集中于復(fù)合方法、復(fù)合機(jī)理、理化及生物學(xué)性能、材料表面和整體結(jié)構(gòu)、表面修飾的方法和機(jī)理以及水凝膠的溶脹擴(kuò)散等,尤其是水凝膠制備、作軟組織替代、藥物緩釋等。后來(lái)利用可生物降解的聚乳酸、聚乙醇酸、聚酸酐、聚谷氨酸、聚亞乙基四乙酸等與膠原共混改性制備可吸收外科縫線、組織工程支架材料(如組織引導(dǎo)再生材料)的相關(guān)研究相對(duì)增多。不過(guò)合成高分子與膠原蛋白共混復(fù)合一些問(wèn)題,如尼龍等不降解高分子材料不能進(jìn)行生理代謝,與膠原蛋白復(fù)合后只能用做皮膚的外層敷料不能長(zhǎng)久代替皮膚,而聚谷氨酸等可生物降解材料。 !膠原蛋白與膠原肽均具有保濕的作用。
一般是白色、透明的粉狀物,分子呈細(xì)長(zhǎng)的棒狀,相對(duì)分子質(zhì)量從約2kD至300kD不等。膠原蛋白具有很強(qiáng)的延伸力,不溶于冷水、稀酸、稀堿溶液,具有良好的保水性和乳化性。膠原蛋白不易被一般的蛋白酶水解,但能被動(dòng)物膠原酶斷裂,斷裂的碎片自動(dòng)變性,可被普通蛋白酶水解。當(dāng)環(huán)境pH為酸性時(shí),膠原的變性溫度為38~39℃。[42]膠原蛋白紅外光譜圖冊(cè)參考資料。膠原蛋白DSC圖譜膠原蛋白是一種兩性電解質(zhì),這取決于兩個(gè)因素,其一,膠原每個(gè)肽鏈具有許多酸性或堿性的側(cè)基;其二,每個(gè)肽鏈的兩端有α-羧基和α-氨基,都具有接受或給予質(zhì)子的能力,它們可在特定的pH值范圍內(nèi),解離產(chǎn)生正電荷或負(fù)電荷,換句話說(shuō),隨著介質(zhì)的pH值,不同膠原即成為帶有許多正電荷或負(fù)電荷的離子。膠原肽鏈側(cè)基的pKa值與其組成氨基酸側(cè)基的pKa值略有不同,這是由于在蛋白質(zhì)分子中受到鄰近電荷的影響所造成的。等電點(diǎn)是,呈現(xiàn)出偏堿性,因?yàn)槟z原的肽鏈中堿性氨基酸比酸性氨基酸多一點(diǎn)。由于是高分子,在水溶液中具有膠體性質(zhì)和一定粘度,粘度在等電點(diǎn)時(shí)比較低,而且溫度越低,粘度越大。 溫度過(guò)高會(huì)引起酶的失活和膠原蛋白的變性。遼寧大豆膠原蛋白廠家
膠原蛋白不易被普通蛋白酶水解,但能被動(dòng)物膠原酶斷裂。安徽小分子膠原蛋白固體飲料
膠原蛋白的熱變性溫度可以通過(guò)測(cè)定膠原蛋白溶液增比黏度的變化來(lái)確定。其方法是將膠原蛋白樣品溶于一定量的緩沖溶液中,并配制成一定濃度的溶液,然后用烏式黏度計(jì)測(cè)量溶液在一定溫度區(qū)間內(nèi)保持一定時(shí)間后的增比黏度,以增比黏度對(duì)溫度作圖,當(dāng)增比黏度變化50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的溫度即為熱變性溫度。熱變性溫度還可通過(guò)拉曼光譜和差示掃描量熱法等進(jìn)行測(cè)定。有人測(cè)得鱸魚、鯽魚和鳙魚魚皮膠原蛋白的熱變性溫度分別為25、27和30℃,它們的棲息水溫分別為26~27、29和32℃,亞氨基酸含量分別為、,與3種魚皮膠原的熱變性溫度相吻合Ⅱ型膠原和Ⅺ型膠原Ⅱ型膠原由三條α1肽鏈組成,即[α1(Ⅱ)]3,富含羥賴氨酸,并且糖化率高,含糖量可達(dá)4%,是軟骨中的主要膠原。另外,即使同一生物,皮和骨膠原蛋白的熱變形溫度也可能不一,像來(lái)自日本海鱸、鮐魚、大頭鯊和眼斑鲀的皮膠原蛋白的變性溫度為℃,而骨膠原蛋白的變性溫度則為℃。附帶結(jié)論是骨膠原蛋白的變性溫度范圍整體上比皮膠原蛋白的變性溫度范圍要高。而且骨膠原蛋白和皮膠原蛋白在不同pH時(shí)的溶解度不同。這表明皮和骨膠原蛋白的分子特性和構(gòu)型存在差異。 安徽小分子膠原蛋白固體飲料
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