湖北提供EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商

EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。上海東寰向您介紹EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的好處。湖北提供EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商

細(xì)胞增殖雖然與多種因素有關(guān)，比如細(xì)胞代謝活性、與細(xì)胞增殖相關(guān)的蛋白表達(dá)、ATP的濃度等等，但是檢測細(xì)胞增殖現(xiàn)象的直接準(zhǔn)確的方法就是用熒光探針直接檢測遺傳物質(zhì)DNA的合成，這種方法是研究細(xì)胞增殖、信號通路、DNA修復(fù)及分化等等方向常用的方法。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)更容易擴(kuò)散，不需要嚴(yán)格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實(shí)情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度河南如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的功能具體介紹。

細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細(xì)胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細(xì)胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測。

這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDASE法(C0051、C1031)基于細(xì)胞熒光示蹤的原理能檢測到單個(gè)的增殖細(xì)胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細(xì)胞，檢測靈敏度不是很高，通常*適用于流式細(xì)胞儀檢測。在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，上述這些基于細(xì)胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補(bǔ)充性檢測方法。EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2-脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒廠家。

使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-ContentScreening,HCS)。對6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞（每孔500μl的Click反應(yīng)液）、96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞（每孔50μl的Click反應(yīng)液）、每管細(xì)胞數(shù)量為10-100萬的流式細(xì)胞儀檢測（每管500μl的Click反應(yīng)液）以及冰凍或石蠟切片的檢測（每個(gè)樣品100-200μl的Click反應(yīng)液），不同規(guī)格的本產(chǎn)品可以提供的反應(yīng)的量詳見說明書中的表。光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518nm；Hoechst33342：藍(lán)色熒光，Ex/Em=346/460nm,boundtoDNA。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒可以去哪里購買？河南如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒

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傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法需要DNA變性，抗原修復(fù)，抗原抗體過夜孵育，操作步驟復(fù)雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大，嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結(jié)合，必須先進(jìn)行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但變性的程度可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。如果變性不充分，會導(dǎo)致BrdU難以暴露，無法檢測，而且變性過程從邊緣向中間滲透，會導(dǎo)致細(xì)胞核DNA的變性不均勻，邊緣模糊不清。如果變性過分，則會導(dǎo)致DNA斷裂，甚至降解，導(dǎo)致核染不均一。另外，不同抗體試劑公司的抗體質(zhì)量不一致，造成難以確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性，且容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。湖北提供EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商