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傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法需要DNA變性，抗原修復(fù)，抗原抗體過夜孵育，操作步驟復(fù)雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大，嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結(jié)合，必須先進行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但變性的程度可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。如果變性不充分，會導(dǎo)致BrdU難以暴露，無法檢測，而且變性過程從邊緣向中間滲透，會導(dǎo)致細胞核DNA的變性不均勻，邊緣模糊不清。如果變性過分，則會導(dǎo)致DNA斷裂，甚至降解，導(dǎo)致核染不均一。另外，不同抗體試劑公司的抗體質(zhì)量不一致，造成難以確保實驗重復(fù)性，且容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。EdU細胞增殖檢測試劑盒可以去哪里購買？浙江哪家公司提供EdU細胞增殖檢測試劑盒購買

另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點擊反應(yīng)，新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針所標記，從而可以使用適當?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細胞。圖1.BeyoClick?EdU檢測法中的點擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細胞DNA標記上生物素等探針。本試劑盒反應(yīng)簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點擊反應(yīng)，無需DNA變性，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標記出摻入的EdU，并且可以檢測到單個細胞的增殖情況。江蘇正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒公司使用EdU細胞增殖檢測試劑盒前的安全檢查。

EdU細胞增殖分析試劑采用click化學技術(shù)，可為新合成的DNA檢測與定量提供比傳統(tǒng)BrdU方法更的替代物。當在DNA合成過程中摻入修飾的核苷EdU（5-乙炔基-2-脫氧尿苷）時，可以通過快速的“click化學”反應(yīng)檢測到它，并且對細胞的破壞作用小。點擊化學相比于BrdU具有更簡便、更快速、更易操作的優(yōu)點。與使用溴脫氧尿苷(BrdU)檢測法不同，Click-iTEdU檢測法不是基于抗體，因此并不需要DNA變性以檢測摻入的核苷。此外，Click-iTEdU可以與R-PE、R-PEtandems和GFP等熒光蛋白復(fù)用提高效力。當您平行比較這些方法時，Click-iTEdU和InvitrogenClick-iTPlusEdU在測定細胞增殖方面的優(yōu)勢是顯而易見的。

    避免反復(fù)凍融。如短時間內(nèi)需多次重復(fù)使用，請于4℃避光保存，有效期半年。使用前須知該試劑是采用成像檢測方法對貼壁細胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細胞可在孵育EU后進行細胞涂片處理，固定后再采用貼壁細胞的染色流程進行檢測。實驗準備1、蓋玻片2、1×PBS（）（用DEPC水配置）3、含TritonX-100的PBS（用DEPC水配置）4、甘氨酸溶液(2mg/ml)（用DEPC水配置）5、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿實驗參考96孔板48孔板24孔板12孔板6孔板EU培養(yǎng)基100μl200μl300μl500μl1ml染色反應(yīng)液100μl200μl300μl500μl1ml實驗步驟(以96孔板，HK2貼壁細胞為例)細胞培養(yǎng)取對數(shù)生長期細胞，以每孔4×103~1×105細胞接種于96孔板中，培養(yǎng)至正常狀態(tài)。EU標記1、將細胞完全培養(yǎng)基中按照500：1的比例加入EU溶液，制成2×EU標記培養(yǎng)基；2、提前將2×EU標記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得1×EU溶液，其中EU的終濃度為500μM；注：1）我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2）配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜；3、每孔加入300μl含EU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基。EdU細胞增殖檢測試劑盒給社會帶來了什么好處？

    按照以下的表格進行染色反應(yīng)液的配制：染色反應(yīng)液組分500μl1ml2ml5ml1×反應(yīng)緩沖液430μl860μlmlml催化劑溶液20μl40μl80μl200μlTAMRA紅色熒光溶液μlμl5μlμl緩沖添加劑50μl100μl200μl500μl3、每孔加入100μl配置好的檢測混合液，以覆蓋細胞為宜，避光、室溫孵育30分鐘；4、棄染色反應(yīng)液，加入100μlTritonX-100細胞滲透液清洗2-3次，每次10分鐘；5、棄細胞滲透液，用PBS洗兩次，每次5分鐘。DNA染色1、將Hoechst33342用RNase-free水溶液1：1000進行稀釋得到終濃度為5μg/ml的1×Hoechst染色液；2、每孔加入100μl1×Hoechst染色液，室溫避光孵育20-30分鐘后，棄染色液；3、每孔加入100μlPBS洗細胞兩次，去掉洗液。圖像獲取及分析建議染色完成后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4°C條件下避光濕潤保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測。EdU細胞增殖檢測試劑盒的重要組成部分。江蘇口碑好的EdU細胞增殖檢測試劑盒價格

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EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。本試劑盒可以檢測到細胞或組織樣品中單個的增殖細胞，同時也可以對細胞或組織樣品總體的細胞增殖情況進行定量檢測。本試劑盒可以檢測培養(yǎng)的細胞或組織樣品，也可以檢測組織切片，但均需提前進行EdU的摻入。細胞增殖能力的檢測是評估細胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。浙江哪家公司提供EdU細胞增殖檢測試劑盒購買