金山區(qū)常規(guī)臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

    對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用，℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長時間高溫會使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在，℃15-30分鐘進行滅菌，某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養(yǎng)基時，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會發(fā)生改變（一般使pH降低），可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。在配制培養(yǎng)基過程中，泡沫的存在對滅菌處理極不利，因為泡沫中的空氣形成隔熱層，使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養(yǎng)基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產(chǎn)生，或適當提高滅菌溫度。血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。金山區(qū)常規(guī)臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

    二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至，若pH值超過，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時期細菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當***素，一般用量與組織細胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養(yǎng)過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均被***為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。楊浦區(qū)特色臨床微生物檢驗培養(yǎng)基地方一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

    兼性厭氧微生物在F值為+，在+。F值與氧分壓和pH有關(guān)，也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下，可通過增加通氣量（如振蕩培養(yǎng)、攪拌）提高培養(yǎng)基的氧分壓，或加入氧化劑，從而增加F值；在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。5、原料來源的選擇在配制培養(yǎng)基時應盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分，特別是在發(fā)酵工業(yè)中，培養(yǎng)基用量很大，利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟價值。例如，在微生物單細胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中，常常利用糖蜜（制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液）、乳清（乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液）、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液（造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿）等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如，工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料，而在我國農(nóng)村，已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外，大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品，如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。6、滅菌處理要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言，更是要進行嚴格的滅菌。

    蒸餾水）919mlSE培養(yǎng)基·6H2OFe—EDTA1mlA5solution1000×1mldistilledwater958mlSoilExtract（土壤提取液）配置方法取花園土未施過肥，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時，冷卻數(shù)小時，在無菌條件下過濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4℃?zhèn)溆谩ompositionoftheA5solutionAddto100mlofdistilledwater:（加入100ml的蒸餾水）（NH4）：將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl（），混勻即可。Na2EDTA1gdistilledwater50mlFeCl3·6H2O81mgHCl（）50mlPr培養(yǎng)基Preparation:to997mLofglass-distilledwater,addgproteosepeptone,gagar,andthefollowingstocksolutions:workingsolutiong/()1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。***培養(yǎng)基薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基蛋白胨10g，瓊脂20g，麥芽糖40g，水1000ml先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40g麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類***所常用的。馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時后，補足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g。1．牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。

    培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基脫水培養(yǎng)基又稱預制干燥培養(yǎng)基，指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。培養(yǎng)基微生物分類編輯語音選擇性培養(yǎng)基：一類根據(jù)某微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基，具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌的功能，***用于菌種篩選等領域。鑒別培養(yǎng)基：一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應的指示劑，從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。例如，伊紅美藍乳糖培養(yǎng)基（EMB）。培養(yǎng)基常見培養(yǎng)基編輯語音細菌培養(yǎng)基牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏，蛋白胨，氯化鈉，瓊脂，水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉，用蠟筆在燒杯外作上記號后，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后，加入瓊脂，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到，分裝在各個試管里，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌：、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基細菌培養(yǎng)基取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細細剁成肉末后，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號，煮沸。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。靜安區(qū)特色臨床微生物檢驗培養(yǎng)基銷售價格

有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。金山區(qū)常規(guī)臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

    且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用1．提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。2．提供***和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)***（氫化可的松、**）、類固醇***（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。3．提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。4．提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷。5．對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被***用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時，粘度起到重要作用。金山區(qū)常規(guī)臨床微生物檢驗培養(yǎng)基誠信互利

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