體外培養(yǎng)的上皮細胞直接生活在培養(yǎng)基中,因此培養(yǎng)基應能滿足細胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、、滲透壓、pH等諸多方面的要求。一、營養(yǎng)成分維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面:1、氨基酸:是細胞合成蛋白質的原料。所有細胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精氨酸、胱氨酸。此外還需要谷氨酰胺,它在細胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,同樣也是合成三、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內都含有必需氨基酸。2、單糖:培養(yǎng)中的細胞可以進行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細胞對葡萄糖的吸收能力比較高,半乳糖比較低。體外培養(yǎng)動物細胞時,幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質。3、維生素:主要扮演輔酶、輔基的角色,必不可少。生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分。4、無機離子與微量元素:細胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素,還需要微量元素,如鐵、鋅、硒、銅、錳、鉬、釩等。 上皮細胞培養(yǎng)基有什么特點?上海中喬新舟告訴您。上海尿道上皮細胞培養(yǎng)基滅菌
含血清細胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的,在轉瓶培養(yǎng)貼壁細胞時,培養(yǎng)液的粘滯性對細胞生長沒有多大影響;但在生物反應器懸浮培養(yǎng)細胞時,細胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉速控制及攪拌剪切力對細胞造成的損傷程度。表面張力對細胞培養(yǎng)有較大的作用,尤其在利用生物反應器進行懸浮培養(yǎng)時,攪拌和通氣都會引起泡沫的產(chǎn)生。對于含血清培養(yǎng)液,由于血清中多種蛋白的存在,攪拌時產(chǎn)生的氣泡較多,氣泡的上升運動對細胞的損傷程度還有爭議,但氣泡的破裂對細胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷,可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑,降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力,減少氣泡的形成。上海尿道上皮細胞培養(yǎng)基滅菌上皮細胞培養(yǎng)基的特點分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
無蛋白無血清細胞培養(yǎng)基(proteinfreemidium,PFM)這類培養(yǎng)基完全不含有動物來源蛋白,但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段,以及類固醇和脂類前體等,以替代動物、生長因子的作用。其特點是完全沒有蛋白或蛋白含量極低,有利于生物制品的分離純化。2)化學組份限定無血清細胞培養(yǎng)基(Chemicallydefinedmedia,CDM)此類培養(yǎng)基是目前安全、為理想的無血清細胞培養(yǎng)基,所有成份的濃度都完全明確,即使其所添加的少量蛋白,也是可經(jīng)過純化處理,成份明確、濃度確定的蛋白。這類培養(yǎng)基較為理想地減少了生產(chǎn)的可變性,提高了生產(chǎn)工藝的重復性,并有效降低了純化成本。
無污染體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質沒有抵抗能力,因此培養(yǎng)基應達到無化學物質污染、無微生物污染(如細菌、、支原體、病毒等)、無其他對細胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質污染(如抗體、補體)。對于天然培養(yǎng)基,污染主要來源于取材過程及生物材料本身,應當嚴格選材,嚴格操作。對于合成培養(yǎng)基,污染主要來源于配制過程,配制所用的水,器皿應十分潔凈,配制后應嚴格過濾除菌。科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉染細胞等。Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前,均經(jīng)過嚴格質控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產(chǎn)日期,保質期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內、無菌檢查(細菌、、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。 上皮細胞培養(yǎng)基如何選擇?上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
細胞培養(yǎng)基常用幾種重要的添加成份及使用過程中應注意的問題酚紅在細胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下,可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值,但低血清或是無血清細胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同,不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗來判定pH值,建議使用pH計進行測定。酚紅通常對含血清的細胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質量并不會產(chǎn)生明顯影響,也可通過純化技術去除,但酚紅在無血清細胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內鈉/鉀失衡,影響細胞生長。碳酸氫鈉在細胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng),此外還具有調節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個標準、安全量,是在科學的基礎上根據(jù)實踐經(jīng)驗所得。但是由于不同的細胞系(株)不同,同一株細胞適應環(huán)境也可能不同(細胞耐受性不同等),且存在的地域性水質差異等,在實際生產(chǎn)過程中也可稍作改動,但使用者需做相應的檢測(理化及細胞生產(chǎn)試驗等)。 上皮細胞培養(yǎng)基的制作方法難嗎?上海中喬新舟告訴您。上海尿道上皮細胞培養(yǎng)基滅菌
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獲取細胞系可以通過原代細胞建立自己的培養(yǎng)系,或者也可選擇從商業(yè)供應商或者非盈利性供應單位(即細胞庫)處購買已經(jīng)建立的細胞系。聲譽良好的供應單位可提供質量的細胞系,而且會認真地對細胞系進行檢測,以確保其完好性,并且未被污染。我們不建議從其他實驗室借用細胞,因為這會帶來很高的污染風險。無論來源如何,使用細胞之前都應確保所有新到細胞系已經(jīng)過支原體污染檢測。培養(yǎng)環(huán)境細胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢在于能夠控制細胞生長的物理化學環(huán)境(即:溫度、pH值、滲透壓、O2和CO2濃度)和生理環(huán)境(即:和營養(yǎng)素濃度)。除溫度外,培養(yǎng)環(huán)境均由生長培養(yǎng)基控制。上海尿道上皮細胞培養(yǎng)基滅菌
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1、原代細胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細胞。
2、培養(yǎng)基:原代細胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細胞轉染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。
4、細胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術服務:綠/紅色熒光蛋白標記、熒光素酶標記、慢bing毒介導基因沉默或過表達及穩(wěn)轉株的構建,細菌基因敲除、細胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學實驗。