解決人工肝臟合成難題，原代肝細胞是理想的肝細胞源。目前，常用的肝細胞源有人原代肝細胞、動物原代肝細胞、liver cancer細胞系HepG2、HepaRG、永生化細胞以及干細胞等。其中，人原代肝細胞是理想的肝細胞源，因為它們具有完整的肝功能和生理特性，能夠更好地模擬人體肝臟的生理狀態(tài)。但是，由于人原代肝細胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實際應用中受到了一定的限制。 相比之下，動物原代肝細胞則具有更好的增殖能力和更便捷的獲取方式，但是由于動物肝臟與人肝存在一定的差異，因此其在模擬人體肝臟生理狀態(tài)方面存在一定的局限性。HepG2和HepaRG則是常用的liver cancer細胞系，它們具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在致瘤風險，因此在臨床應用中需要謹慎使用。 永生化細胞則是通過基因工程技術將原代肝細胞轉化為無限增殖的細胞系，如HepG2.2.15和Huh7等。這些細胞系具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在一定的局限性和風險。 綜上所述，原代肝細胞是理想的肝細胞源，選擇合適的肝細胞源需要綜合考慮其功能、增殖能力、安全性等因素，以期達到想要的生物人工肝效果。人原代肝細胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實際應用中受到了一定的限制。廣州鴨原代肝細胞實驗
原代肝細胞的3D培養(yǎng)是一種新興的細胞培養(yǎng)技術，它可以更好地模擬人體內肝臟的生理環(huán)境，從而更準確地研究肝臟疾病的發(fā)生機制。相比傳統(tǒng)的2D培養(yǎng)方式，3D培養(yǎng)可以提供更多的細胞-細胞和細胞-基質相互作用，使細胞在培養(yǎng)過程中更加穩(wěn)定和健康。 在3D培養(yǎng)中，原代肝細胞被培養(yǎng)在一種類似于人體內肝臟的三維結構中，可以更好地模擬人體內肝臟的生理環(huán)境。此外，3D培養(yǎng)還可以提供更多的氧氣和營養(yǎng)物質，使原代肝細胞在培養(yǎng)過程中更加穩(wěn)定和健康。 原代肝細胞的3D培養(yǎng)模型可以用于研究肝臟疾病的發(fā)生機制和治療方法，例如liver cancer、肝纖維化、肝硬化等。此外，它還可以用于藥物篩選和毒性測試，從而更好地評估藥物的安全性和有效性。 原代肝細胞的3D培養(yǎng)是一種具有廣闊應用前景的新興細胞培養(yǎng)技術，它可以更準確地模擬人體內肝臟的生理環(huán)境，為肝臟疾病的研究提供更加可靠的實驗模型。北京樹鼩原代肝細胞培養(yǎng)立沃生物的原代肝細胞提供多種細胞培養(yǎng)技術培訓服務，包括細胞培養(yǎng)技術培訓、細胞培養(yǎng)實驗指導等。
原代肝細胞比較常用的模型是二維模型。在膠原包被的培養(yǎng)板上，原代肝細胞可貼壁培養(yǎng)，同樣高密度培養(yǎng)有助于肝細胞分化狀態(tài)的維持。但原代肝細胞在體外的培養(yǎng)時間較短，人原代肝細胞在體外培養(yǎng)3天內可保持乙肝病毒易感性，培養(yǎng)兩周發(fā)生明顯的去分化以及細胞凋亡情況。北京大學鄧宏魁教授發(fā)表在《科學》上的數(shù)據(jù)顯示，通過添加5種小分子化合物抑制原代肝細胞去分化進程，可在體外長期維持肝細胞的分化狀態(tài)，維持時間長達八周。那為什么原代肝細胞在體外容易去分化呢？肝細胞在體外缺乏了肝細胞與肝非實質細胞的交流，又或者缺乏了肝臟的三維結構?；谝陨蠁栴}與分析，我在碩士期間開展了肝細胞與肝非實質細胞的共培養(yǎng)工作。結果顯示，通過共培養(yǎng)，原代肝細胞可在體外長期培養(yǎng)，并在鋪板后的72天內仍然保持了乙肝病毒的易感性，說明缺乏細胞間交流是原代肝細胞發(fā)生去分化的原因之一。到目前為止，原代肝細胞體外維持四個月的時間記錄仍然沒有被打破。
近年來，隨著細胞培養(yǎng)技術和分子生物學技術的不斷發(fā)展，原代肝細胞在基礎研究中的應用的作用越來越重要，取得了一系列重要進展。首先，原代肝細胞在肝臟發(fā)育和肝臟再生方面的研究中發(fā)揮了重要作用。研究表明，原代肝細胞可以分化為多種肝細胞類型，如肝細胞、膽管細胞和星形細胞等，從而為肝臟發(fā)育和再生提供了重要的細胞來源。此外，原代肝細胞還可以通過體外培養(yǎng)和移植等方法促進肝臟再生和修復。其次，原代肝細胞在肝臟疾病的研究中也有重要應用。研究表明，原代肝細胞可以模擬肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，如肝纖維化、livercancer等，從而為疾病的機制研究和新藥開發(fā)提供了重要的實驗模型。此外，原代肝細胞還可以用于篩選和評價肝臟疾病的藥物開發(fā)。原代肝細胞在藥物代謝和毒性研究中也有重要作用。研究表明，原代肝細胞可以模擬肝臟對藥物的代謝和毒性反應，從而為藥物的安全性評價和藥代動力學研究提供了重要的實驗模型。此外，原代肝細胞還可以用于篩選和評價藥物的代謝和毒性。原代肝細胞在基礎研究中的應用前景廣闊，將為肝臟生理和病理的研究以及藥物開發(fā)和安全性評價等方面提供重要支持。原代肝細胞是一種從新鮮肝臟組織中分離出來的細胞，高度保留了肝臟本身的酶水平和功能。。
原代肝細胞是簡單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導產(chǎn)生的肝臟細胞或是cancer細胞系，原代肝細胞在造模的同時不需要復雜的對細胞進行重編程，以及誘導分化，可以更方便更快速的進行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細胞能夠更準確的反應體內的真實情況，有數(shù)據(jù)表明，原代肝細胞比iPSC誘導產(chǎn)生的肝細胞內的堿基取代少數(shù)倍，同時這些細胞還保留了捐獻者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個優(yōu)勢在于，原代肝細胞衍生的Organoid可以提供獨特的肝毒模型，因為原代細胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細胞不僅擁有捐贈者特有的生理特性，同時也具備其他兩種肝細胞在應對病原體時的生理反應。目前，分離原代肝細胞的方法有直接剪切法、組織塊消化法和兩步膠原酶灌流法等。浙江人體原代肝細胞分離
原代肝細胞冷凍復蘇后若用于懸浮培養(yǎng)，由于失巢凋亡一般壽命是12小時左右，而貼壁肝細胞可以存活達15天。廣州鴨原代肝細胞實驗
原代肝細胞體外培養(yǎng)一般培養(yǎng)在瓶皿等容器中，根據(jù)它們是否能貼附在支持物上生長的特性，可分為懸浮型和貼壁型兩大類。 原代肝細胞懸浮生長時可以呈單個細胞或細小的細胞團，胞體為圓形。其優(yōu)點是在培養(yǎng)液中生長，生存空間大，允許長時間生長，便于大量繁殖。正常貼壁原代肝細胞具有接觸抑制和密度抑制的雙重特性，細胞相互接觸后可抑制細胞的運動，因此細胞不會相互重疊于其上面生長。細胞生長、匯合成片后，雖發(fā)生接觸抑制，但只要營養(yǎng)充分，仍可增殖分裂，但當細胞數(shù)量達到一定密度后，由于營養(yǎng)的枯竭和代謝物的影響，細胞分裂停止，稱為密度抑制。 當肝細胞被分離后，可以進行懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。懸浮培養(yǎng)的原代肝細胞在開始的4~6h內細胞色素P450酶的活性和體內一致，隨時間的延長而迅速下降，故懸浮肝細胞一般用于代謝穩(wěn)定性研究或代謝物譜研究。貼壁培養(yǎng)的原代肝細胞有足夠的時間從損傷中恢復過來，保持了正常肝細胞的生物學特征及代謝活性，一般用于酶誘導研究、藥物細胞毒性研究、慢代謝藥物的代謝穩(wěn)定性或產(chǎn)物推斷研究。廣州鴨原代肝細胞實驗