原代肝細胞培養(yǎng)中去除endotoxin是十分重要的。原代肝細胞培養(yǎng)是一種常用的實驗方法，但在培養(yǎng)過程中，細胞可能會受到endotoxin的污染，這會影響實驗結(jié)果的準確性。 endotoxin是一種由細菌產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，可以引起炎癥反應(yīng)和細胞損傷。在原代肝細胞培養(yǎng)中，endotoxin可能來自于培養(yǎng)基、細胞培養(yǎng)器具或細胞本身。因此，需要采取一些措施來去除endotoxin。 一種常用的方法是使用endotoxin去除劑，例如聚陽離子樹脂（Polyclonal Cationic Resin，PCR）或聚乙烯醇（Polyvinyl Alcohol，PVA）。這些去除劑可以吸附endotoxin，從而減少其對細胞的影響。使用endotoxin去除劑的方法比較簡單，只需要將其加入培養(yǎng)基中，然后將細胞培養(yǎng)在其中即可。 可以使用endotoxin檢測試劑盒來檢測培養(yǎng)基中的endotoxin含量。如果檢測結(jié)果顯示endotoxin含量較高，可以考慮更換培養(yǎng)基或使用endotoxin去除劑。 除了使用去除劑和檢測試劑盒外，還可以采取一些預(yù)防措施來減少endotoxin的污染。例如，使用無菌技術(shù)操作、定期更換培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基、避免過度攪拌和振蕩等。 去除endotoxin是原代肝細胞培養(yǎng)中必須注意的問題。采取適當?shù)拇胧┛梢詼p少endotoxin的污染，保證實驗結(jié)果的準確性。原代肝細胞可以用于新藥研發(fā)企業(yè)有關(guān)藥物代謝、毒理、靶向誘導(dǎo)相關(guān)的實驗，是有效的體外實驗?zāi)Ｐ?。廣東魚原代肝細胞培養(yǎng)方法
原代肝細胞是簡單有效的生物體外模型。相比于其他類型誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝臟細胞或是cancer細胞系，原代肝細胞在造模的同時不需要復(fù)雜的對細胞進行重編程，以及誘導(dǎo)分化，可以更方便更快速的進行高通量藥理研究。此外和另外兩種方式相比，原代肝細胞能夠更準確的反應(yīng)體內(nèi)的真實情況，有數(shù)據(jù)表明，原代肝細胞比iPSC誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝細胞內(nèi)的堿基取代少數(shù)倍，同時這些細胞還保留了捐獻者的特有特征，是較為理想的研究模型。另一個優(yōu)勢在于，原代肝細胞衍生的Organoid可以提供獨特的肝毒模型，因為原代細胞保留了患者特有的I期II期藥物代謝情況。原代細胞不僅擁有捐贈者特有的生理特性，同時也具備其他兩種肝細胞在應(yīng)對病原體時的生理反應(yīng)。汕尾鮭魚原代肝細胞培養(yǎng)立沃生物的原代肝細胞可提供不同狀態(tài)的細胞，如貼壁細胞、懸浮細胞等，滿足客戶基于使用場景的個性化需求。
在原代肝細胞培養(yǎng)過程中，如何檢測污染情況？在原代肝細胞培養(yǎng)過程中，檢測污染情況是非常重要的，可以通過以下幾種方法進行檢測：1.肉眼觀察：通過肉眼觀察培養(yǎng)物的外觀、顏色、透明度等是否異常，如果出現(xiàn)渾濁、變色、沉淀等異常情況，可能是污染所致。2.顯微鏡觀察：使用顯微鏡觀察培養(yǎng)物中的細胞形態(tài)、數(shù)量、分布等是否異常，如果出現(xiàn)細胞變形、破裂、死亡等異常情況，可能是污染所致。3.細菌培養(yǎng)：將培養(yǎng)物接種到細菌培養(yǎng)基中，觀察是否有細菌生長，如果有細菌生長，說明培養(yǎng)物受到了細菌污染。：使用PCR技術(shù)檢測培養(yǎng)物中的細菌、病毒等微生物的DNA，如果檢測到DNA存在，說明培養(yǎng)物受到了污染?？傊?，在原代肝細胞培養(yǎng)過程中，需要定期進行污染檢測，及時發(fā)現(xiàn)和處理污染，以保證培養(yǎng)物的質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性。
原代肝細胞可以用于乙肝病毒的對照試驗。為探究不同類型肝細胞對乙型肝炎病毒（HBV）的影響，以及不同藥物和生物學(xué)處理對HBV的影響，可以選擇了人原代肝細胞（PHH）樹鼩原代肝細胞（PTH）、hNTCP穩(wěn)定表達豬肝細胞（PPH-hNTCP）和hNTCP穩(wěn)定表達liver cancer細胞系（Huh7D-hNTCP）作為研究對象。 采用HBV模型，將不同類型肝細胞融合HBV，并進行藥物處理和生物學(xué)處理。藥物處理包括小分子化合物和中藥提取物等，生物學(xué)處理包括過表達、敲除siRNA和shRNA等。通過對處理后的細胞進行評價，可以了解不同藥物和生物學(xué)處理對HBV的影響。 這種研究方法的意義在于探究不同類型肝細胞對HBV的影響，為研究HBV的機制提供重要的實驗數(shù)據(jù)。同時，本研究還可以為開發(fā)新型抗HBV藥物提供參考，為臨床克服乙型肝炎提供新的思路和方法。立沃生物的原代肝細胞可以配套提供多種細胞凍存設(shè)備支持，包括程序降溫儀，低溫液氮罐等。
解決人工肝臟合成難題，原代肝細胞是理想的肝細胞源。目前，常用的肝細胞源有人原代肝細胞、動物原代肝細胞、liver cancer細胞系HepG2、HepaRG、永生化細胞以及干細胞等。其中，人原代肝細胞是理想的肝細胞源，因為它們具有完整的肝功能和生理特性，能夠更好地模擬人體肝臟的生理狀態(tài)。但是，由于人原代肝細胞的獲取和保存非常困難，且存在批次差異和有限的增殖能力，因此在實際應(yīng)用中受到了一定的限制。 相比之下，動物原代肝細胞則具有更好的增殖能力和更便捷的獲取方式，但是由于動物肝臟與人肝存在一定的差異，因此其在模擬人體肝臟生理狀態(tài)方面存在一定的局限性。HepG2和HepaRG則是常用的liver cancer細胞系，它們具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在致瘤風(fēng)險，因此在臨床應(yīng)用中需要謹慎使用。 永生化細胞則是通過基因工程技術(shù)將原代肝細胞轉(zhuǎn)化為無限增殖的細胞系，如HepG2.2.15和Huh7等。這些細胞系具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性，但是存在一定的局限性和風(fēng)險。 綜上所述，原代肝細胞是理想的肝細胞源，選擇合適的肝細胞源需要綜合考慮其功能、增殖能力、安全性等因素，以期達到想要的生物人工肝效果。原代肝細胞冷凍復(fù)蘇后若用于懸浮培養(yǎng)，由于失巢凋亡一般壽命是6小時左右，而貼壁肝細胞可以存活達15天。東莞羅非魚原代肝細胞培養(yǎng)步驟
立沃生物原代肝細胞配套提供多種細胞培養(yǎng)實驗合作服務(wù)，包括細胞培養(yǎng)實驗合作、細胞培養(yǎng)實驗項目合作等。廣東魚原代肝細胞培養(yǎng)方法
貼壁培養(yǎng)是一種常用的細胞培養(yǎng)方法，可以使原代肝細胞在培養(yǎng)皿表面附著生長，形成單層細胞群落。原代肝細胞的貼壁培養(yǎng)需要注意以下幾點： 1. 分離和準備細胞：從新鮮的動物肝臟中分離出原代肝細胞后，需要進行細胞計數(shù)和質(zhì)量檢測，確保細胞數(shù)量和質(zhì)量符合要求。 2. 培養(yǎng)基的選擇：原代肝細胞的培養(yǎng)基需要選擇適合其生長和代謝的培養(yǎng)基，常用的培養(yǎng)基包括DMEM、RPMI-1640等。 3. 培養(yǎng)皿的涂層：為了使原代肝細胞能夠附著生長，需要在培養(yǎng)皿表面涂層一定濃度的膠原蛋白、明膠或者其他細胞黏附因子。 4. 細胞接種和培養(yǎng)：將準備好的原代肝細胞接種到涂層好的培養(yǎng)皿中，加入適量的培養(yǎng)基，放入恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。需要注意的是，原代肝細胞的培養(yǎng)時間較短，一般在3-5天左右，因此需要及時更換培養(yǎng)基和進行細胞觀察。 原代肝細胞的貼壁培養(yǎng)可以通過在培養(yǎng)皿上加一定的的吸附涂層來達到讓原代肝細胞快速貼壁的效果。廣東魚原代肝細胞培養(yǎng)方法