美國(guó)微滴式數(shù)字PCR分析應(yīng)用

在定量PCR時(shí)，我們常常糾結(jié)一個(gè)問(wèn)題，究竟是相對(duì)定量還是***定量呢？如今，你無(wú)需糾結(jié)了，因?yàn)閿?shù)字PCR（digitalPCR）來(lái)了。盡管這兩種技術(shù)有些類(lèi)似，都是估計(jì)起始樣品中的核酸量，但它們有一個(gè)重要的區(qū)別。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)或參照基因來(lái)測(cè)定核酸量，而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù)，是對(duì)起始樣品的***定量。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域：拷貝數(shù)變異、突變檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究（如等位基因不平衡表達(dá)）、二代測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證、miRNA表達(dá)分析、單細(xì)胞基因表達(dá)分析等。數(shù)字PCR是定量技術(shù)，基于單分子PCR方法來(lái)進(jìn)行計(jì)數(shù)的核酸定量，是一種定量的方法。美國(guó)微滴式數(shù)字PCR分析應(yīng)用

數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù)，而是更好的補(bǔ)充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺(tái)。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場(chǎng)景下的多樣化核酸檢測(cè)需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測(cè)方面。國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面，也不斷“攻城略地”。數(shù)字PCR作為當(dāng)下靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù)，盡管目前國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)異軍突起，在臨床市場(chǎng)中實(shí)現(xiàn)了彎道超車(chē)，但未來(lái)仍然需要聚焦客戶(hù)需求，不斷夯實(shí)底層創(chuàng)新，同時(shí)在檢測(cè)成本、自動(dòng)化、試劑盒申報(bào)注冊(cè)、出海國(guó)際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國(guó)際局勢(shì)，波譎云詭。在百年未有之大變局，實(shí)現(xiàn)中華民族的偉大復(fù)興，需要國(guó)內(nèi)企業(yè)瞄準(zhǔn)技術(shù)高地，以爭(zhēng)分奪秒的精神，解決技術(shù)"卡脖子"的難題，不斷攻堅(jiān)克難，自主創(chuàng)新，在與國(guó)際品牌的同臺(tái)競(jìng)技中，彰顯中國(guó)實(shí)力。上海雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR試劑盒臻準(zhǔn)推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。

產(chǎn)物越短，往往擴(kuò)增效率越高。模板二級(jí)結(jié)構(gòu)（Templatesecondarystructure）：PCR變性中和變性后的單鏈DNA不夠穩(wěn)定，容易自發(fā)折疊形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。應(yīng)避免可形成穩(wěn)定二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板鏈區(qū)域，因?yàn)槿绻０彐溞纬傻亩?jí)結(jié)構(gòu)在退火溫度下穩(wěn)定存在，定位在模板鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)處的引物將無(wú)法同模板鏈相結(jié)合。使用mfold可預(yù)測(cè)引物待結(jié)合的區(qū)域是否存在復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)。設(shè)計(jì)引物時(shí)，盡量使引物定位在模板二級(jí)結(jié)構(gòu)以外的序列上。避免具有4個(gè)以上相同的連續(xù)堿基的區(qū)域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸階段聚合酶“滑動(dòng)（PolymeraseSlippage）”。選擇GC含量（GCContent）在50-60%之間的區(qū)域。如果高GC含量區(qū)域不可避免，可以嘗試提高退火溫度，并使用添加劑，例如甘油，

相比于qPCR，dPCR在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)中具有以下優(yōu)勢(shì)：（1）檢測(cè)靈敏度高：理論上dPCR的靈敏度可達(dá)1個(gè)拷貝，而實(shí)際應(yīng)用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數(shù)值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目標(biāo)拷貝數(shù)下得到精確的結(jié)果；通常轉(zhuǎn)基因比參考基因（內(nèi)源基因）濃度低很多；（2）前處理簡(jiǎn)單且受基質(zhì)成分干擾較小：dPCR反應(yīng)效率和精密度受到食品基質(zhì)成分干擾影響較小，可應(yīng)用于混合基質(zhì)樣品中低豐度DNA的檢測(cè)；（3）dPCR對(duì)抑制劑的敏感性較低：由于dPCR結(jié)果表示為“有熒光“或“無(wú)熒光”，即使存在抑制劑降低了熒光強(qiáng)度仍可以表示為“有熒光；（4）適合多重轉(zhuǎn)基因檢測(cè)：食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉(zhuǎn)基因片段，可以進(jìn)行多重dPCR檢測(cè)，提高分析效率。同時(shí)，dPCR可以直接溯源至SI國(guó)際單位制摩爾，適合單一、雙重及多重轉(zhuǎn)基因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究，一次可識(shí)別不同的轉(zhuǎn)基因區(qū)域。下面詳細(xì)進(jìn)行說(shuō)明。PCR本質(zhì)上是將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬(wàn)個(gè)PCR反應(yīng)。

數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢(shì)而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢(shì)，梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)與溯源技術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）方面的進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴(kuò)增過(guò)程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴(kuò)增和樣品的檢測(cè)。對(duì)于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個(gè)部件之間仍然有較大的改進(jìn)空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價(jià)值。表1中總結(jié)了部分常見(jiàn)的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類(lèi)型，以及相對(duì)在硬件、便攜性、性?xún)r(jià)比和自動(dòng)化程度上的比較。在數(shù)字PCR賽道，塔歌生物將加速胎兒染色體非整倍體無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查注冊(cè)證的申報(bào)。上海雙螺旋生物儀器數(shù)字PCR試劑盒

數(shù)字PCR適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域。美國(guó)微滴式數(shù)字PCR分析應(yīng)用

在熒光定量PCR應(yīng)用已經(jīng)如此的情況下，緣何數(shù)字PCR仍然能橫空出世？中心點(diǎn)在于熒光定量PCR盡管為科研和臨床市場(chǎng)應(yīng)用提供了非常重要的檢測(cè)工具支撐，但仍然有尚未被滿(mǎn)足的客戶(hù)需求。熒光定量PCR需要基于標(biāo)準(zhǔn)品制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量，屬于相對(duì)定量，操作較為復(fù)雜，且終端用戶(hù)對(duì)其結(jié)果的重復(fù)性、靈敏性、精密度、分辨率、對(duì)PCR反應(yīng)抑制劑的耐受性等方面有更高的期待。數(shù)字PCR通過(guò)將反應(yīng)體系進(jìn)行有限稀釋至成千上萬(wàn)的反應(yīng)單元中，實(shí)現(xiàn)了核酸靶標(biāo)的單分子擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增結(jié)束后，基于終點(diǎn)法對(duì)陽(yáng)性液滴數(shù)和總液滴數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)合泊松分布原理，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始樣本的定量。其極大地簡(jiǎn)化了操作步驟，并且大幅提高了檢測(cè)性能，尤其在低豐度或較低豐度的核酸檢測(cè)上（靈敏性可達(dá)0.001-0.0001%），其優(yōu)異的性能得到了終端用戶(hù)的認(rèn)可。美國(guó)微滴式數(shù)字PCR分析應(yīng)用

雙螺旋科學(xué)儀器，2015-04-17正式啟動(dòng)，成立了數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等幾大市場(chǎng)布局，應(yīng)對(duì)行業(yè)變化，順應(yīng)市場(chǎng)趨勢(shì)發(fā)展，在創(chuàng)新中尋求突破，進(jìn)而提升臻準(zhǔn),美國(guó)艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，把握市場(chǎng)機(jī)遇，推動(dòng)精細(xì)化學(xué)品產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步。業(yè)務(wù)涵蓋了數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀等諸多領(lǐng)域，尤其數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀中具有強(qiáng)勁優(yōu)勢(shì)，完成了一大批具特色和時(shí)代特征的精細(xì)化學(xué)品項(xiàng)目；同時(shí)在設(shè)計(jì)原創(chuàng)、科技創(chuàng)新、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范等方面推動(dòng)行業(yè)發(fā)展。我們?cè)诎l(fā)展業(yè)務(wù)的同時(shí)，進(jìn)一步推動(dòng)了品牌價(jià)值完善。隨著業(yè)務(wù)能力的增長(zhǎng)，以及品牌價(jià)值的提升，也逐漸形成精細(xì)化學(xué)品綜合一體化能力。公司坐落于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房，業(yè)務(wù)覆蓋于全國(guó)多個(gè)省市和地區(qū)。持續(xù)多年業(yè)務(wù)創(chuàng)收，進(jìn)一步為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)、社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展做出了貢獻(xiàn)。