植物染色體倍性鑒定在植物遺傳育種中具有十分重要的作用。在育種過程中,通過花藥(花粉小孢子)、未受精子房等途徑再生出的植株,往往是單倍體、雙單倍體及其他倍性植株的混合群體,有效的倍性鑒定是了解其遺傳背景和進一步應用的基礎。多倍體育種是植物育種的一種途徑之一,它不僅可以對性狀進行改良,還可以提高植物體內各種有效成分的含量。利用倍性鑒定,準確地辨認多倍體并將其挑選出來,也是多倍體育種中的重要環(huán)節(jié)一環(huán)。另外,倍性鑒定也可用于分析細胞分裂活動等生理和遺傳研究。倍性鑒定特別是苗期倍性鑒定,不僅可以減少育種工作量,而且可以減少土地和資金的投入。國內外關于各種鑒定方法報道不少,但較分散。本文綜述了各種倍性鑒定方法并對其優(yōu)缺點進行了評選。不同倍性植株在細胞學和形態(tài)解剖學上具有明顯差異,目前主要有兩大類型直接鑒定法和間接鑒定法。CyFlow Analyser倍性分析儀配備365nm光源,高效激發(fā)DAPI染料,避免RNA的影響和次生代謝物的影響。珠三角CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀系統(tǒng)
CyFlow Ploidy Analysere倍性分析儀一機全能:1、特殊設計,專為醫(yī)學、農業(yè)科學、育種及水產養(yǎng)殖領域提供完美的倍性和周期解決方案2、配備365nm光源,高效激發(fā)DAPI染料,避免RNA的影響和次生代謝物的影響3、配備532nm光源,高效激發(fā)PI染料,激發(fā)效率遠超488nm和561nm激光器4、超高熒光分辨率, DNA檢測CV<1%,適合高精度倍性實驗。5、采用TVAC定體積相對計數功能,無需相對計數微球,隨時掌握樣本濃度6、樣本流速從0-20ul/s連續(xù)精確可調,適合極低濃度樣本的檢測7、可選配自動上樣器CyFlow Robby,兼容48孔板,96孔板和流式管,實現無人值守的高通量上樣8、結合配套植物倍性試劑,可在5min內完成植物倍性檢測實驗。9、支持樣本快速處理和檢測;10、基于PI和DAPI的熒光DNA分析;11、提供樣本快速處理試劑盒,用于 DAPI 和PI 標記的倍體分析;12、配套的儀器質控試劑;13、所有樣本的細胞核染色(包括 ,葉、根、愈合組織、懸浮組織、雜交細胞等);14、可用于任何動物組織、培養(yǎng)細胞、懸浮細胞的倍體分析。深圳倍性分析儀流式倍性分析儀是一種用于生物學、農學、林學領域的分析儀器。
上機(CyFlow Ploidy Analysere倍性分析儀)操作前,樣品保存要求:新鮮葉片濾紙打濕后包裹樣品保濕,放入自封袋中做好標記,再放入泡沫箱密封。若短期內不能檢測??蓪⑷~片使用硅膠干燥法進行保存。每一個測試需求的葉片面積是0.5 cm2,大約小拇指甲蓋大小。準備測試的葉片應為次量的 4 倍以上,已備實驗重復使用。準備標樣,要有已知倍性的標樣作為參照,來預測待測樣品的倍性,檢測結果是一個相對值,并非相對值。特別注意:一定要隨樣本寄出同物種親緣較近的已知倍性樣本,作為參照,否則樣本無法確定倍性。
樣品上樣到儀器 典型的實驗從單細胞懸浮液中的熒光標記細胞開始,但是可以使用任何顆粒類型的樣品。將樣品置于流式細胞儀上,樣品被吸到儀器中,細胞懸浮在一種被稱為鞘液的生理緩沖液。流體系統(tǒng)(管道、泵和閥)將初始樣品懸浮液排列成單列細胞流,并使細胞通過流式細胞儀以進行分析。流式細胞儀的流體學。流動池(也稱為流式小室)使樣品中的細胞(顆粒)排成一列。這是單細胞分析的關鍵步驟。激光檢測點 細胞與激光發(fā)生相互作用的地方稱為激光檢測點。您也可能聽過它的另一個名字“激光攔截”。這是熒光檢測發(fā)生的地方。當激光束照射到單個細胞時,一些光會撞到細胞內的物理結構,導致光線散射。這種光散射可被測量,并且與相對細胞大小和細胞內的結構相關。這些測量稱為前向角散射(FSC)和側角散射(SSC),取決于收集光的位置相對于激光路徑的角度。幾乎同時,來自激光器的光激發(fā)與細胞相關的所有熒光團,產生熒光發(fā)射。所有這些光被檢測器收集并通過流式細胞儀的電子元件進行處理。通過激光檢測點之后,流體系統(tǒng)會將不需要的細胞輸送到廢液桶中。在細胞分選儀中,細胞將在激光檢測點被分選和輸送到收集管中,以供后續(xù)實驗使用。CyFlow Analyser倍性分析儀由光源、光學系統(tǒng)、液流系統(tǒng)、計算機、軟件組成。
利用流式細胞儀快速檢測棉花 DNA 倍性,為棉花的倍性鑒定和育種研究提供基礎數據。以陸地棉珂字棉 312( Gossypium hirsutumLinn.)的老葉和嫩葉為試材,用 WPB 和 LB01 解離液提取細胞核,經 PI 染色后使用流式細胞儀檢測細胞倍性。結果發(fā)現,用 WPB 解離液提取棉花嫩葉獲得的細胞核用于倍性檢測效果更好,表現為主峰離子團清晰而集中、背景碎片少,可以得到明顯的主峰、雜峰更少,且收集到的細胞核數目更多。初步建立了利用流式細胞儀快速檢測棉花 DNA 倍性的方法。CyFlow Analyser倍性分析儀有365nm的紫外光源/532nm的Nd-YAG綠色激光器。深圳CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀細胞周期檢測
流式細胞分析是一種現代分析技術,其在生物學和醫(yī)學領域被范圍廣使用,具有“實驗室的 CT”之稱。珠三角CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀系統(tǒng)
待測細胞被制備成單細胞懸液,經特異性熒光染料染色后置于專門樣品管中,在氣體壓力推動下被壓入流動室,流動室內充滿鞘液(不含細胞或微粒的緩沖液),在高壓作用下從鞘液管噴出包裹細胞,使細胞排成單列形成細胞液柱,依次通過檢測區(qū)。液柱與高度聚焦的激光束垂直相交,被熒光染料染色的細胞受到激光激發(fā)產生熒光信號和散射光信號,這些光信號通過波長選擇的濾光片,由相應的光電管和電子檢測器接收并轉換成電信號,經放大器放大后送入計算機并進行分析顯示和結果輸出,測定的結果常用單參數直方圖、雙參數散點圖、輪廓(等高)圖和三維立體圖來表示。珠三角CyFlow Ploidy Analyzer倍性分析儀系統(tǒng)
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