數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（digitalpolymerchainreaction，dPCR）技術(shù)因具有高靈敏度、受基質(zhì)干擾少等優(yōu)勢(shì)而被廣用于轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)。本研究綜述了數(shù)字PCR技術(shù)的原理、系統(tǒng)各部件的優(yōu)劣勢(shì)，梳理了數(shù)字PCR技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)與溯源技術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）方面的進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì)，以期為轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)領(lǐng)域提供參考依據(jù)。dPCR的擴(kuò)增過(guò)程大致上可以分為3步：樣品的分散、樣品的熱循環(huán)擴(kuò)增和樣品的檢測(cè)。對(duì)于數(shù)字PCR儀器系統(tǒng)，各個(gè)部件之間仍然有較大的改進(jìn)空間，要發(fā)揮部件之間的協(xié)同作用是很重要的，而且有持續(xù)研究的價(jià)值。表1中總結(jié)了部分常見(jiàn)的數(shù)字PCR系統(tǒng)的類型，以及相對(duì)在硬件、便攜性、性價(jià)比和自動(dòng)化程度上的比較。臻準(zhǔn)推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng)。廣州一體化數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
全自動(dòng)樣本制備系統(tǒng)DMX-1000配備氣流發(fā)生裝置和氣壓控制裝置，能夠?qū)崿F(xiàn)高精度壓力控制，結(jié)合**產(chǎn)品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技術(shù)，DMX-1000可以在70秒內(nèi)快速、穩(wěn)定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴數(shù)量可達(dá)2萬(wàn)-60萬(wàn)個(gè)，粒徑范圍30-120μm，性能穩(wěn)定。除此之外，銳訊還提供微流控芯片的定制服務(wù)，以滿足不同的液滴數(shù)目和尺寸要求。平板式快速擴(kuò)增儀TC-1000，不再使用傳統(tǒng)的96孔板，而是特制的液滴擴(kuò)增芯片；不再是傳統(tǒng)的“燒開水”加熱模式，代之以平板式單液滴層均勻受熱的方式。在這樣的改進(jìn)之下，TC-1000完成40個(gè)PCR循環(huán)只需約45分鐘（TC-2.0升級(jí)版更是把時(shí)間縮短到了25分鐘！），大幅縮短了等待時(shí)間，提升了實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。這對(duì)實(shí)驗(yàn)人員而言，無(wú)疑是莫大的福利——高效完成工作，不加班——愛(ài)工作，也愛(ài)生活。賽默飛數(shù)字PCR原理通過(guò)不同cluster的位置進(jìn)行突變位點(diǎn)的判斷時(shí)存在誤判的現(xiàn)象。
數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)步驟包括：1）試劑配制：將10xdPCRBuffer、dPCR酶、引物和探針、無(wú)核酸酶水混合成dPCR預(yù)混液，并分裝到8聯(lián)排管中或96孔板中；將各待測(cè)樣本的核酸模板、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照分別加入相應(yīng)的8聯(lián)排管中或96孔板中；2）芯片進(jìn)樣：在小海龜BioDigital·青全自動(dòng)樣品處理系統(tǒng)上進(jìn)行芯片上反應(yīng)液進(jìn)樣和液滴生成；3）芯片擴(kuò)增：在小海龜BioDigital·青PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行芯片上PCR擴(kuò)增反應(yīng)；4）芯片閱讀：在小海龜BioDigital·青生物芯片閱讀儀上進(jìn)行芯片上熒光信號(hào)閱讀；5）數(shù)據(jù)分析：使用生物芯片數(shù)據(jù)分析·青軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和報(bào)告導(dǎo)出；
數(shù)字PCR技術(shù)的出現(xiàn)不是為了完全取代原有分子診斷技術(shù)，而是更好的補(bǔ)充和完善現(xiàn)有技術(shù)平臺(tái)。數(shù)字PCR為不同應(yīng)用場(chǎng)景下的多樣化核酸檢測(cè)需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測(cè)方面。國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)在商業(yè)化應(yīng)用方面，也不斷“攻城略地”。數(shù)字PCR作為當(dāng)下靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù)，盡管目前國(guó)產(chǎn)數(shù)字PCR企業(yè)異軍突起，在臨床市場(chǎng)中實(shí)現(xiàn)了彎道超車，但未來(lái)仍然需要聚焦客戶需求，不斷夯實(shí)底層創(chuàng)新，同時(shí)在檢測(cè)成本、自動(dòng)化、試劑盒申報(bào)注冊(cè)、出海國(guó)際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國(guó)際局勢(shì)，波譎云詭。在百年未有之大變局，實(shí)現(xiàn)中華民族的偉大復(fù)興，需要國(guó)內(nèi)企業(yè)瞄準(zhǔn)技術(shù)高地，以爭(zhēng)分奪秒的精神，解決技術(shù)"卡脖子"的難題，不斷攻堅(jiān)克難，自主創(chuàng)新，在與國(guó)際品牌的同臺(tái)競(jìng)技中，彰顯中國(guó)實(shí)力。數(shù)字PCR應(yīng)用前景廣闊，可用于病原微生物檢測(cè)、基因檢測(cè)、無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查、測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證等領(lǐng)域。
產(chǎn)物越短，往往擴(kuò)增效率越高。模板二級(jí)結(jié)構(gòu)（Templatesecondarystructure）：PCR變性中和變性后的單鏈DNA不夠穩(wěn)定，容易自發(fā)折疊形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。應(yīng)避免可形成穩(wěn)定二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板鏈區(qū)域，因?yàn)槿绻０彐溞纬傻亩?jí)結(jié)構(gòu)在退火溫度下穩(wěn)定存在，定位在模板鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)處的引物將無(wú)法同模板鏈相結(jié)合。使用mfold可預(yù)測(cè)引物待結(jié)合的區(qū)域是否存在復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu)。設(shè)計(jì)引物時(shí)，盡量使引物定位在模板二級(jí)結(jié)構(gòu)以外的序列上。避免具有4個(gè)以上相同的連續(xù)堿基的區(qū)域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸階段聚合酶“滑動(dòng)（PolymeraseSlippage）”。選擇GC含量（GCContent）在50-60%之間的區(qū)域。如果高GC含量區(qū)域不可避免，可以嘗試提高退火溫度，并使用添加劑，例如甘油，數(shù)字PCR主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法。廣州一體化數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
模板 DNA 量越多，熒光達(dá)到域值的循環(huán)數(shù)越少，即 Ct 值越小。廣州一體化數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
數(shù)字PCR技術(shù)是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術(shù)。該技術(shù)將一個(gè)樣本分成幾到幾十萬(wàn)份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個(gè)單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板)，在每個(gè)反應(yīng)單元中分別對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增結(jié)束后，將有熒光信號(hào)的微滴判讀為1，沒(méi)有熒光信號(hào)的微滴判讀為0，終根據(jù)泊松分布原理以及陽(yáng)性微滴的比例，計(jì)算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。定量：不再依賴于Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線，直接給出靶序列的起始濃度，實(shí)現(xiàn)真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性：數(shù)字PCR可實(shí)現(xiàn)萬(wàn)分之一稀有樣本的定量，可用于極微量核酸樣本檢測(cè)、復(fù)雜背景下的稀有突變檢測(cè)、表達(dá)量微小差異鑒定、單細(xì)胞基因表達(dá)等方面。數(shù)字PCR在分子診斷領(lǐng)域?qū)?huì)發(fā)揮巨大的作用，數(shù)字PCR適用于生物標(biāo)志物研究、拷貝數(shù)變異分析、微生物檢測(cè)、轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè)、mRNA和miRNA檢測(cè)、基因相對(duì)表達(dá)研究等，并對(duì)遺傳病、、產(chǎn)前診斷的研究提供了一種全新的技術(shù)思路與手段，具有廣的、不可替代的應(yīng)用前景。廣州一體化數(shù)字PCR性能特點(diǎn)
廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司總部位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房，是一家儀器儀表批發(fā);商品批發(fā)貿(mào)易（許可審批類商品除外）;商品零售貿(mào)易（許可審批類商品除外）;教學(xué)設(shè)備的研究開發(fā);辦公設(shè)備耗材批發(fā);生物技術(shù)開發(fā)服務(wù);生物技術(shù)推廣服務(wù);計(jì)算機(jī)批發(fā);生物技術(shù)轉(zhuǎn)讓服務(wù);農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;水處理設(shè)備的研究、開發(fā);食品科學(xué)技術(shù)研究服務(wù);環(huán)保設(shè)備批發(fā);辦公設(shè)備批發(fā);的公司。雙螺旋科學(xué)儀器作為精細(xì)化學(xué)品的企業(yè)之一，為客戶提供良好的數(shù)字PCR，純水機(jī)，病理切片機(jī)，倍性分析儀。雙螺旋科學(xué)儀器致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對(duì)用戶產(chǎn)品上的貼心，為用戶帶來(lái)良好體驗(yàn)。雙螺旋科學(xué)儀器創(chuàng)始人姜艷，始終關(guān)注客戶，創(chuàng)新科技，竭誠(chéng)為客戶提供良好的服務(wù)。