濟南無血清細胞凍存液廠家

細胞凍存液的作用是什么？滲透性冷凍保護劑：可以滲透到細胞內(nèi)，一般是一些小分子物質(zhì)，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非滲透性冷凍保護劑：不能滲透到細胞內(nèi)，一般是些大分子物質(zhì)，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及Hetastarch等。冷凍保護劑同溶液中的水分子結(jié)合，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成，同時冷凍保護劑可以通過在細胞內(nèi)外維持一定的摩爾濃度，降低細胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細胞免受溶質(zhì)的損傷。滲透性冷凍保護劑的保護機制是在細胞冷凍懸液完全凝固之前，滲透到細胞內(nèi)，在細胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度，降低細胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，從而保護細胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷同時。細胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮。無血清細胞凍存液：一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子。濟南無血清細胞凍存液廠家

無血清細胞凍存液，細胞凍存與復蘇后，平均活細胞回收比例超過80%。與含血清凍存液比較，BI無血清凍存液細胞存活率都有較佳的表，BI無血清細胞凍存液也適用于動物血清培養(yǎng)的細胞凍存。復蘇細胞：1.將細胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于37度水浴快速溶解回溫。此時可準備培養(yǎng)基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。2.于生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復沖融，使細胞團塊化凍。3.先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細胞。4.倒去上清液，以新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。5.隔天更換新鮮培養(yǎng)基，并觀察細胞存活狀況。蘇州無血清細胞凍存液廠家供應快速凍存即不需要經(jīng)過梯度降溫，直接將細胞放入-80 ℃冰箱24h。

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度

無血清凍存液通用于各種動物細胞株（tumour細胞和常規(guī)細胞），凍存細胞可在-80℃長期保存（>5年）。配方成分明確，不含動物來源性蛋白，不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養(yǎng)成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。該產(chǎn)品添加了細胞沉降穩(wěn)定劑，可延緩細胞在凍存過程中的沉降速率，防止細胞互相擠壓，影響細胞凍存效果。另外，添加了細胞膜保護劑、滲透性細胞膜內(nèi)保護劑、非滲透性細胞保護劑等多種冷凍保護劑，這些成分在溶液中同水分子結(jié)合，發(fā)生水合作用，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而少冰晶的形成，能較大降低細胞在凍存過程中冰晶對于細胞的損傷，有效提高細胞復蘇存活率。該產(chǎn)品配方成分明確，不含血清、不含動物源性蛋白，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全；不光適用于常規(guī)細胞系、原代細胞，同時亦適合于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。程序降溫凍存技術(shù)要點是慢凍，標準的凍存程序為降溫速率-1～-2/℃ min。

無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優(yōu)勢：傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量的死亡。）隨著細胞治好以及細胞儲存產(chǎn)業(yè)發(fā)展，細胞凍存也面臨從科研應用走向產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化。重慶正規(guī)無血清細胞凍存液進貨價

無血清凍存液用途：無血清細胞凍存液用于免疫細胞及干細胞的存儲。濟南無血清細胞凍存液廠家

無血清細胞凍存液復蘇細胞實驗步驟：1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3.離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4.清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5.加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。濟南無血清細胞凍存液廠家