免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些局限性。 優(yōu)點(diǎn): 1. 特異性強(qiáng)：IP技術(shù)利用特異性抗體對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行捕獲，因此具有很高的特異性。 2. 富集低豐度蛋白：可以從小量樣本中富集低豐度的目標(biāo)蛋白，有助于研究稀有蛋白。 3. 研究蛋白質(zhì)相互作用：通過(guò)Co-IP等變體技術(shù)，可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。 4. 操作簡(jiǎn)便：IP實(shí)驗(yàn)步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，容易在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施。 缺點(diǎn): 1. 對(duì)抗體質(zhì)量依賴性高：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能導(dǎo)致假...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和蛋白質(zhì)特性的重要方法。它具有一些明顯的優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些局限性。 優(yōu)點(diǎn): 1. 特異性強(qiáng)：IP技術(shù)利用特異性抗體對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行捕獲，因此具有很高的特異性。 2. 富集低豐度蛋白：可以從小量樣本中富集低豐度的目標(biāo)蛋白，有助于研究稀有蛋白。 3. 研究蛋白質(zhì)相互作用：通過(guò)Co-IP等變體技術(shù)，可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。 4. 操作簡(jiǎn)便：IP實(shí)驗(yàn)步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，容易在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施。 缺點(diǎn): 1. 對(duì)抗體質(zhì)量依賴性高：需要高質(zhì)量的特異性抗體，否則可能導(dǎo)致假...

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)復(fù)合物組成以及特定蛋白質(zhì)的表達(dá)和純化的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 基本原理 免疫沉淀技術(shù)基于抗體與特定蛋白質(zhì)（抗原）之間的特異性相互作用。通過(guò)使用針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質(zhì)的復(fù)雜樣本中捕獲并富集目標(biāo)蛋白質(zhì)。 免疫沉淀技術(shù)有多種類型，包括： 1. 個(gè)別免疫沉淀法（Individual IP） 2. 免疫共沉淀法（Co-IP） 3. 染色質(zhì)免疫沉淀法（ChIP） 4. RNA免疫沉淀法（RIP） 近年來(lái)，免疫沉淀技術(shù)在固相支持物的選擇上有了很大...

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，...

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。 瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。 與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。 簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，...

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。 1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對(duì)目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。 2. 親和力：抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過(guò)程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。 3. 抗體類型：?jiǎn)慰寺】贵w提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。 4. 應(yīng)用驗(yàn)證：選擇已經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的抗體，這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能性。 5. 供應(yīng)商信息：選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商，并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評(píng)價(jià)，以幫助做出決策。 免疫沉淀...

RIP實(shí)驗(yàn)步驟通常包括： 1. 細(xì)胞收集與交聯(lián)：培養(yǎng)細(xì)胞至適當(dāng)密度。使用交聯(lián)劑（如甲醛）進(jìn)行交聯(lián)，以固定蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。 2. 細(xì)胞裂解：收集細(xì)胞并進(jìn)行裂解，釋放RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物。在裂解過(guò)程中添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解。 3. 超聲處理：使用超聲波破壞細(xì)胞，獲得更小的染色質(zhì)片段，這有助于后續(xù)步驟中抗體的接觸。 4. 除去細(xì)胞碎片：通過(guò)離心去除細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞，收集含RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的上清液。 5. 免疫沉淀：將針對(duì)特定RNA結(jié)合蛋白（RBP）的抗體加入到上清液中。孵育一段時(shí)間，使抗體與目標(biāo)蛋白充分結(jié)合。 6. 捕獲免疫復(fù)合物：添...

Co-IP的實(shí)驗(yàn)步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質(zhì)。 2. 抗體結(jié)合：然后，將特異性抗體（針對(duì)已知蛋白質(zhì)之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會(huì)特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白（誘餌蛋白）上。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。 4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來(lái)捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標(biāo)蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。 5. 洗滌：捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。 6. 洗脫和分析：免疫復(fù)合物被洗脫...

真核生物的基因組 DNA 以染色質(zhì)（Chromatin）的形式存在。因此，研究蛋白質(zhì)與 DNA 在染色質(zhì)環(huán)境中的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑，而染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術(shù)是目前公認(rèn)的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達(dá)機(jī)制研究中不可或缺的技術(shù)之一。 它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復(fù)合物，并將其切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)免疫學(xué)方法（抗體親和）沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA，通過(guò)對(duì)目的片段的純化與后期檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡(jiǎn)稱IP）是一種生物化學(xué)方法，它利用特異性抗體對(duì)抗原進(jìn)行親和純化。在含有目的抗原的細(xì)胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads（預(yù)先將Protein A/G固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、Protein A/G與抗體的Fc的特異性，形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，檢測(cè)是否存在目的蛋白。 免疫沉淀技術(shù)常用于從細(xì)胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測(cè)或其他檢測(cè)技術(shù)的蛋白和其他生物分子。它的目標(biāo)是分離足夠用于Western Blot或其他檢測(cè)方法檢測(cè)...

免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實(shí)驗(yàn)方法基于以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織樣本被裂解，以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和RNA復(fù)合物。 2.抗體特異性結(jié)合：裂解后的樣本中加入針對(duì)特定RNA結(jié)合蛋白的抗體。這些抗體能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合到目標(biāo)蛋白。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。 4. 親和介質(zhì)捕獲：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來(lái)捕獲這些抗體-蛋白質(zhì)-RNA復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下與之結(jié)合的復(fù)合物。 ...

Co-IP的實(shí)驗(yàn)步驟： 1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質(zhì)。 2. 抗體結(jié)合：然后，將特異性抗體（針對(duì)已知蛋白質(zhì)之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會(huì)特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白（誘餌蛋白）上。 3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。 4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來(lái)捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標(biāo)蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。 5. 洗滌：捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。 6. 洗脫和分析：免疫復(fù)合物被洗脫...

“免疫沉淀”一般是指采用固定在固相支持物上的結(jié)合蛋白，進(jìn)行小規(guī)模的蛋白質(zhì)親和純化的實(shí)驗(yàn)。更確切地說(shuō)，IP是采用固定在微珠支持物(一般是瓊脂糖樹(shù)脂)上的特定抗體，從復(fù)雜的混合物中，純化單一抗原的實(shí)驗(yàn)。固定化蛋白質(zhì)復(fù)合物的組裝既可以分步進(jìn)行，也可以一步完成。 常見(jiàn)的加樣順序：抗體和樣本(如細(xì)胞裂解物)一起孵育，然后加入親和微珠，用于捕獲抗體-抗原復(fù)合物。也可以將抗體和微珠(通過(guò)抗體結(jié)合蛋白，如蛋白A、G或A/G等，直接或間接結(jié)合抗體)先進(jìn)行孵育，然后再加入含有抗原的樣本。當(dāng)抗原、抗體和固相支持物產(chǎn)生結(jié)合以后，充分洗滌微珠，再采用適當(dāng)?shù)南疵摼彌_液從支持物上洗脫抗原。 免疫沉淀技術(shù)IP實(shí)驗(yàn)步驟。北...

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)： 1. 細(xì)胞裂解：首先需要收集細(xì)胞并裂解它們，以釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。這通常通過(guò)添加含有蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液來(lái)完成，以防止蛋白質(zhì)降解。 2. 裂解物上清：裂解后的細(xì)胞混合物通常需要通過(guò)離心來(lái)去除未破碎的細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞，從而獲得上清。 3. 抗體的添加：將特定于目標(biāo)蛋白的抗體加入到裂解物中。這些抗體將特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白上。 4. 免疫復(fù)合物的形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合形成免疫復(fù)合物。 5. 免疫復(fù)合物的捕獲：使用Protein A/G結(jié)合的磁珠來(lái)捕獲免疫...