膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：1.為了防止塵埃、靜電傷害機(jī)器，每天做實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)用清水拖地。2.拉制儀使用前需預(yù)熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時(shí)，請(qǐng)先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開(kāi)放...

膜片鉗電生理記錄技術(shù)：膜片鉗技術(shù)的基本原理：膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí)，因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位，測(cè)量單個(gè)離子通道開(kāi)放產(chǎn)生的微小電流，這種...

膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸，之后對(duì)微電極另一端開(kāi)口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開(kāi)口...

膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下，與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接，導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái)，由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻（1～5MΩ），只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制，從微電極引...

Real-time PCR鏈反應(yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題分析與解決方法：反應(yīng)緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。引物量過(guò)多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。模板量過(guò)多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)只適用于藥物的初篩和二次篩選，且對(duì)樣本有很高的選擇性，而傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)可適用于各種樣本，應(yīng)用范圍廣，能夠分析檢測(cè)所有的離子通道類(lèi)型，同時(shí)能夠分析離子通道的動(dòng)力學(xué)特征。因此目前，傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)仍然是不可替代的。在進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí)，玻璃電極給...

膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。是用來(lái)研究單個(gè)離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球...

為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較，在real-timeQ-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號(hào)的域值，一般這個(gè)域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)（baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的...

膜片鉗實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法：膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段，目前在科學(xué)研究中使用越來(lái)越普遍。但在具體膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作的過(guò)程中，總會(huì)遇到各種各樣的問(wèn)題，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成很多困擾。本次講座主要從實(shí)驗(yàn)角度出發(fā)，以簡(jiǎn)單，實(shí)用的原則，著重講解實(shí)驗(yàn)中遇到的各種問(wèn)題，以及解...

引物的設(shè)計(jì)對(duì)于這個(gè)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要，因?yàn)镽eal-time PCR的檢測(cè)靈敏度比較高，所以相應(yīng)的對(duì)引物設(shè)計(jì)的要求就很高。普通的要求規(guī)則大家都知道，還有幾點(diǎn)必須注意：1，引物的錯(cuò)配率（引物錯(cuò)配形成引物二聚體，但是SYBR照樣能嵌入進(jìn)去，結(jié)果導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的誤差很大，重...

膜片鉗記錄的幾種形式：細(xì)胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上，形成高阻封接，在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過(guò)微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制，高分辨測(cè)量膜電流，稱為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的...

膜片鉗操作實(shí)驗(yàn)：膜片鉗放大器是整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的中心，它可用來(lái)作單通道或全細(xì)胞記錄，其工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。從原理來(lái)說(shuō)，膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式，即電阻反饋式和電容反饋式，前者是一種典型的結(jié)構(gòu)，后者因用反饋電容取代了...

國(guó)際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性，不會(huì)產(chǎn)生沉淀，同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間。關(guān)于胎牛血清的滅活：真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ](méi)有形成有效補(bǔ)體，如果針對(duì)補(bǔ)體滅活的話，就不需要。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)決定。胎牛血清的濃度：胎牛血清通常是以2%...

為何血清會(huì)存在批間差？如何避免此影響？因?yàn)檠鍋?lái)源于動(dòng)物，其組成成分有1000種左右，每個(gè)批號(hào)的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對(duì)細(xì)胞的影響，XP建議先進(jìn)行批號(hào)測(cè)試，篩選合適的批號(hào)，備好庫(kù)存（血清未開(kāi)封時(shí)，在-20℃下可保...

很好的胎牛血清：好的血清應(yīng)是透明清亮，土黃色或棕黃色，無(wú)沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁，不透明，含許多沉淀物，說(shuō)明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性；若棕紅色，說(shuō)明血清中的血紅蛋白含量太高，有溶血現(xiàn)象。胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說(shuō)明...

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)...

胎牛顧名思義就是指還在母牛身體里的小牛，所以胎牛血清的采集工作，便是先從懷孕中的母牛身體里取出胎牛（通常5-8個(gè)月胎齡），之后對(duì)未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血，完成的工作以后便再通過(guò)一系列的工藝處理獲得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集已出生10天內(nèi)的小牛，而且...

胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質(zhì)較為高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較...

熱滅活：一般是以56℃，30分鐘來(lái)處理已解凍的血清，因?yàn)榇思訜岵襟E，可以使補(bǔ)體去活化，而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有：溶細(xì)胞活性，平滑肌的收縮，肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放，增強(qiáng)吞噬作用，淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和。有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅清，對(duì)大多...

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么？取血年齡不同：牛血清按照牛取血時(shí)間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清指的是取自未出生，母牛剖腹得來(lái)的胎牛。國(guó)產(chǎn)胎牛血清（并無(wú)明確定義，但通常以此稱）的指的是出生4-6小時(shí)，且未進(jìn)行哺乳進(jìn)食的牛，有時(shí)還稱作國(guó)產(chǎn)新生牛。 新生牛血清指的是...

很好的胎牛血清：微生物，包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類(lèi)病原毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過(guò)0.1μm過(guò)濾，大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入，又無(wú)法...

較為低血清試驗(yàn)的要求。內(nèi)有毒的檢測(cè)：內(nèi)有毒的，又叫脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS），存在于革蘭氏陰性菌的細(xì)胞外膜。臨床上，內(nèi)有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示，如腦膜炎球菌。動(dòng)物體內(nèi)，內(nèi)有毒的能夠?qū)е掳l(fā)熱或者誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)；細(xì)胞培養(yǎng)中，內(nèi)有毒的能夠誘導(dǎo)細(xì)胞反...

國(guó)內(nèi)科研人員購(gòu)買(mǎi)胎牛血清的現(xiàn)狀：難辨真假。 原因很多，一方面是國(guó)內(nèi)血清市場(chǎng)這幾年是愈發(fā)的混亂了，很多商家都盯上了這塊“蛋糕”，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)市場(chǎng)能見(jiàn)到的各種來(lái)源的血清品牌大于50種，使用者在不了解國(guó)家政策和相關(guān)知識(shí)的前提下很難去辨別和選擇安全、穩(wěn)定、合規(guī)的胎牛血清。...

血清的保存應(yīng)該注意：熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物明顯增多，而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量，補(bǔ)體參與反...

小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)？來(lái)源不同：胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同...

購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),使用時(shí)需要融化,融化過(guò)程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,待溶解完成,我們觀察到的胎牛血清會(huì)表現(xiàn)出黃色或紅色。并不是越紅越好,也不是越黃越好,淡黃色到淡紅色才是比較正常的顏色范圍。很多培養(yǎng)細(xì)胞的寶寶會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量...

除了對(duì)血清進(jìn)行檢測(cè)，有何更直觀的方式分辨血清質(zhì)量？目測(cè)法，我們可根據(jù)血清的顏色，沉淀，澄清度等進(jìn)行區(qū)分。顏色：顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同，可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進(jìn)口血清質(zhì)量較為好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色，較差質(zhì)量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當(dāng)?shù)?，由于血紅蛋...

胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分，對(duì)于研究細(xì)胞的科學(xué)人士來(lái)說(shuō)，血清都不會(huì)陌生，其中胎牛血清是實(shí)驗(yàn)操作的?？汀Ｒ话愣?，胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過(guò)一系列工藝處理獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)...

胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對(duì)于細(xì)微差異即可決定成敗的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)來(lái)說(shuō)，選擇來(lái)源安全、品質(zhì)優(yōu)良的胎牛血清至關(guān)重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品，胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞，新西蘭， 美國(guó)， 南美（烏拉圭&巴西）以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的區(qū)域。業(yè)內(nèi)通常會(huì)根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況，...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染：這是PCR反應(yīng)中很主要很常見(jiàn)的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大（一般為1013拷貝/ml），遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽(yáng)性。還有一種容易忽視，很可能造成PCR產(chǎn)物污染的...