黑龍江轉(zhuǎn)染試劑指導(dǎo)

陽(yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染試劑結(jié)合機(jī)制：以陽(yáng)離子聚合物EZTransCellReagent為例，在優(yōu)化RNA干擾（RNAi）條件的研究中發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)離子聚合物通過(guò)與RNA分子結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)染14。例如，設(shè)計(jì)針對(duì)GFP的shRNA，使用EZ轉(zhuǎn)染試劑將其轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，shRNA***降低了GFP的表達(dá)。預(yù)稀釋的轉(zhuǎn)染試劑在室溫下以及小核酸的存在可增加轉(zhuǎn)染效率，且在24小時(shí)時(shí)達(dá)到峰值。與環(huán)狀核酸相比，線性核酸與陽(yáng)離子聚合物結(jié)合時(shí)顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率和更高的基因組整合率。作用特點(diǎn)：陽(yáng)離子聚合物介導(dǎo)的RNAi條件優(yōu)化后，為未來(lái)的RNAi研究提供了有用的數(shù)據(jù)。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。黑龍江轉(zhuǎn)染試劑指導(dǎo)

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類(lèi)型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在多種差異。以下將詳細(xì)闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類(lèi)型中轉(zhuǎn)染機(jī)制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑：機(jī)制概述：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽(yáng)離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成，其轉(zhuǎn)染機(jī)制主要是通過(guò)與帶負(fù)電的RNA分子結(jié)合，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物能夠與細(xì)胞膜相互作用，通過(guò)內(nèi)吞作用或膜融合等方式進(jìn)入細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞后，脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子，使其能夠在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細(xì)胞類(lèi)型中的表現(xiàn)：在腎*細(xì)胞系786-O和ACHN中，目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用，但可以推測(cè)其可能通過(guò)類(lèi)似的機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞，影響細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)和細(xì)胞生長(zhǎng)。例如，微小RNA-1180（miR-1180）轉(zhuǎn)染對(duì)腎*細(xì)胞生長(zhǎng)產(chǎn)生影響，雖然未明確指出轉(zhuǎn)染試劑類(lèi)型，但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可能在類(lèi)似的研究中發(fā)揮作用1。在MEF細(xì)胞、3T3細(xì)胞、Hela細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞中，MessageMax脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細(xì)胞核中的定位。這表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在不同類(lèi)型的細(xì)胞中能夠有效地將RNA分子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)，并實(shí)現(xiàn)特定蛋白的表達(dá)。上海肝臟轉(zhuǎn)染試劑其結(jié)構(gòu)的一個(gè)共同特征是分子中存在許多帶正電的基團(tuán)，這些基團(tuán)被質(zhì)子化成帶正電的聚合物。

對(duì)細(xì)胞活力的影響：一些研究表明，在陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下雞TRPV6基因RNA干擾（RNAi）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時(shí)轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好，對(duì)細(xì)胞的毒性作用較小3。在人肝瘤兩種細(xì)胞模型中，通過(guò)比較LipofectamineRnaimax和Genmute轉(zhuǎn)染劑發(fā)現(xiàn)，用基因***的細(xì)胞呈現(xiàn)熒光陰性對(duì)照siRNA的更高攝取，并且觀察到與基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相對(duì)于脂質(zhì)積rnaimax的細(xì)胞具有較高的活力6。有研究使用兩種常見(jiàn)的RNA干擾（RNAi）轉(zhuǎn)染試劑DharmaFECT1和INTERFERin，在模擬轉(zhuǎn)染中使用非靶向siRNAs，結(jié)果表明這些試劑會(huì)引起HeLa細(xì)胞脂質(zhì)組的變化，但功能影響仍有待研究，這也暗示在RNAi實(shí)驗(yàn)中使用適當(dāng)?shù)哪M轉(zhuǎn)染對(duì)照非常重要。

考慮細(xì)胞毒性低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)于保持細(xì)胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要。評(píng)估細(xì)胞活力：可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的存活率、增殖能力等指標(biāo)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對(duì)C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率時(shí)，通過(guò)優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度，使所有試劑在達(dá)到較高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取、敲低效率和毒性情況的研究中，新開(kāi)發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時(shí)毒性比較低7。選擇溫和的試劑：一些轉(zhuǎn)染試劑可能對(duì)細(xì)胞的毒性較小，例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦，結(jié)果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦，且沒(méi)有可測(cè)量的毒性8。提高 RNA 轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率同時(shí)降低細(xì)胞死亡。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的基因轉(zhuǎn)染方法，不同類(lèi)型的細(xì)胞在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過(guò)程中會(huì)表現(xiàn)出不同的特性和差異。以下是對(duì)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對(duì)不同類(lèi)型細(xì)胞影響差異的詳細(xì)分析：

一、轉(zhuǎn)染效率的差異宮頸*細(xì)胞：對(duì)于Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個(gè)細(xì)胞，miRNA量為1μl，Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細(xì)胞中為1:0.7時(shí)，24小時(shí)后可獲得比較高轉(zhuǎn)染效率1。與含血清的培養(yǎng)基相比，只有Siha細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，在轉(zhuǎn)染前能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率（P＜0.01）1。PC12細(xì)胞：lipo2000轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞的比較好轉(zhuǎn)染條件為lipo2000用量為5μL，DNA2μg，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h，這種條件下的PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)40%，且未影響細(xì)胞的正常分泌3。HepG2細(xì)胞：陽(yáng)離子脂質(zhì)體的擴(kuò)散系數(shù)在lipoplex形成過(guò)程中與lipoplex的物理化學(xué)特性、lipoplex中質(zhì)粒DNA的可及性以及每代謝活性的基因表達(dá)對(duì)數(shù)密切相關(guān)2。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，主要的內(nèi)吞途徑從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞，此外，所有脂質(zhì)體尺寸均觀察到巨胞飲作用2。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：脂質(zhì)體介導(dǎo)的CD基因在鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中成功表達(dá)，于轉(zhuǎn)染48h后達(dá)峰值5。

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類(lèi)型的修飾寡核苷酸也被引入市場(chǎng)，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。云南轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

RNA 轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類(lèi)型中的效果存在明顯差異。黑龍江轉(zhuǎn)染試劑指導(dǎo)

二、影響因素的差異細(xì)胞接種密度：不同類(lèi)型的細(xì)胞在比較好轉(zhuǎn)染效率下的細(xì)胞接種密度不同。例如，宮頸*細(xì)胞Hela和Siha的比較好接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個(gè)細(xì)胞1，而研究中Caco-2細(xì)胞的比較好接種密度為2×10?9。DNA用量：各種細(xì)胞所需的DNA用量也存在差異。如PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染的比較好DNA用量為2μg3，而Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)比較好DNA用量為4μg9。脂質(zhì)體與DNA的比例：不同細(xì)胞類(lèi)型對(duì)應(yīng)的比較好脂質(zhì)體與DNA的比例不同。Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細(xì)胞中為1:0.71；Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)比較好脂質(zhì)體與DNA比例為2.5:19。復(fù)合物形成時(shí)間和孵育時(shí)間：不同細(xì)胞類(lèi)型對(duì)脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物的形成時(shí)間和細(xì)胞與復(fù)合物的孵育時(shí)間要求不同。例如，Hela和Siha細(xì)胞未明確提及復(fù)合物形成時(shí)間和孵育時(shí)間，而Caco-2細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物形成時(shí)間為30min，細(xì)胞與復(fù)合物孵育時(shí)間為6h9。黑龍江轉(zhuǎn)染試劑指導(dǎo)