CY3免疫熒光IF

來源: 發(fā)布時間:2024-04-18

熒光的猝滅:熒光分子的輻射能力在受到激發(fā)光較長時間的照射后會減弱甚至猝滅,這是由于激發(fā)態(tài)分子的電子不能回復到基態(tài),所吸收的能量無法以熒光的形式發(fā)射。一些化合物有天然的熒光猝滅作用而被用作猝滅劑,以消除不需用的熒光。因此熒光物質的保存應注意避免光(特別是紫外光)的直接照射和與其他化合物的接觸。在熒光抗體技術中常用一些非熒的色素物質如亞甲藍、堿性復紅。伊文思藍或低濃度的過錳酸鉀、碘溶液等對標本進行得當復染,以減弱非特異性熒光本質,使特異熒光更突出顯示。使用熒光抗體方法是免疫熒光技術中常見的操作步驟。CY3免疫熒光IF

CY3免疫熒光IF,免疫

熒光色素:四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC)結構式如下:較大吸引光波長為550nm,較大發(fā)射光波長為620nm,呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明,可配合用于雙重標記或對比染色。其異硫氰基可與蛋白質結合,但熒光效率較低。免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發(fā)展較早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。NLRP3免疫免疫熒光技術可以用于研究病毒傳播和免疫應答。

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免疫熒光應用范圍:其應用范圍極其普遍,可以測定內分泌、蛋白質、多肽、核酸、神經遞質、受體、細胞因子、細胞表面抗原、肉瘤標志物、血藥濃度等各種生物活性物質。根據診斷類別,又可分為傳染性疾病、內分泌、藥物檢測、免疫學、血型鑒定等。許多物質都可產生熒光現象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光并能作為染料使用的有機化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。異硫氰酸熒光素為黃色或橙黃色結晶粉末,易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4,較大吸收光波長為490495nm,較大發(fā)射光波長520530nm,呈現明亮的黃綠色熒光。

免疫熒光Coons等于1941年初次采用熒光素進行標記而獲得成功。這種以熒光物質標記抗體而進行抗原定位的技術稱為熒光抗體技術。用熒光抗體示蹤或檢查相應抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術,因為熒光色素不但能與抗體球蛋白結合,用于檢測或定位各種抗原,也可以與其他蛋白質結合,用于檢測或定位抗體,但是在實際工作中熒光抗原技術很少應用,所以人們習慣稱為熒光抗體技術,或稱為免疫熒光技術。以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術顯示和檢查細胞或組織內抗原或半抗原物質等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學技術。使用已知熒光抗原標記物質來檢查相應抗體的方法被稱為熒光抗原技術。

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基于熒光成像的技術對于查詢細胞和組織的結構和功能方面非常有用。當與免疫化學結合時,熒光成像技術的分析能力增加,增強了這種技術在普遍的研究和臨床應用中的實用性,使其成為寶貴的工具。免疫熒光顯微鏡通過使活細胞成像能夠可視化整個細胞器,徹底改變了細胞生物學領域。免疫組織化學和免疫細胞化學是結合抗原抗體結合能力進行細胞分析的常用熒光成像技術。免疫熒光(IF)是一種強大的免疫染色技術,利用顯微鏡觀察與靶蛋白和其他目標分子結合的熒光素標記抗體。免疫熒光用于鑒定細胞中的細胞和組織特異性抗原;可視化蛋白質的存在與否、細胞定位和活化狀態(tài);并分析免疫反應。免疫熒光技術可以用于研究環(huán)境污染和毒物作用。NLRP3免疫

免疫熒光技術可以用于研究肉瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。CY3免疫熒光IF

通過不同顏色熒光標記不同的靶標,可以直觀的觀察同一樣品細胞內不同結構和蛋白。熒光標記靶標的方法主要包括熒光染料、免疫標記、熒光融合蛋白等——這幾種方法均可選擇性標記細胞內的結構和蛋白,讓您在成像時更輕松地進行觀察。細胞生物學采用的很多熒光工具基本上都是熒光基團。這些熒光基團經過不同的方法修飾或結合到不同的分子上,從而具備了某些的功能與特定的細胞器或蛋白結合。通過化學修飾,單個熒光基團可以產生許多變體形式,且每種變體都有不同的特異性。CY3免疫熒光IF