醫(yī)用細胞培養(yǎng)基

    Dulbecco’s改良培養(yǎng)基–DMEM（Dulbecco’sModifiedEagleMedium）是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的，與MEM培養(yǎng)基相比，氨基酸的含量增加了2倍，維生素的含量增加了4倍，同時還增加了非必須氨基酸、微量鐵離子以及**酸鈉。DMEM培養(yǎng)基**初設計葡萄糖含量為1000mg/L（低糖型），后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L（高糖型），現(xiàn)已廣泛應用于各種細胞的培養(yǎng)。針對***的細胞培養(yǎng)應用，我們提供多種組分的DMEM改良培養(yǎng)基。高糖型培養(yǎng)基普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn)，例如利用CHO細胞表達EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的培養(yǎng)。不含葡萄糖的培養(yǎng)基可以根據(jù)研究需要，隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度，方便快捷。L-谷氨酰胺（Glutamine）是細胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素，但其在溶液中不穩(wěn)定，會自發(fā)降解，不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基，可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量，在使用時添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細胞的生長。 RPMI-1640是改進型的McCoy ‘s 5A培養(yǎng)基，使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)。醫(yī)用細胞培養(yǎng)基

DMEM 培養(yǎng)基成分復雜且精妙，除了富含氨基酸、維生素、葡萄糖、等主要成分外，還包含多種無機鹽。這些無機鹽在維持細胞內(nèi)外滲透壓平衡方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，確保細胞不會因滲透壓異常而出現(xiàn)失水皺縮或吸水膨脹等情況，維持細胞正常形態(tài)。同時，無機鹽中的離子，如鈣離子、鎂離子等，參與細胞內(nèi)的信號傳導過程，影響細胞的生長、分化和代謝等生理活動，為細胞的生命活動提供穩(wěn)定的離子環(huán)境，與其他營養(yǎng)成分協(xié)同作用，共同促進細胞的健康生長。貴州RPMI-1640細胞培養(yǎng)基源頭直供Ham’sF-10營養(yǎng)混合物（Ham’sF-10Nutrient Mixture）是由Ham針對CHO細胞無血清培養(yǎng)設計出的一種培養(yǎng)基。

    培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素,細胞通?？赡褪?60mOsm/kg～320mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細胞所需pH在-。但是，細胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進行緩沖，因此，氣相中的CO2濃度應與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為；如果CO2濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為。細胞培養(yǎng)瓶蓋不應擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細胞培養(yǎng)瓶的蓋子應擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。

    隨意調(diào)節(jié)葡萄糖的濃度，方便快捷。高糖型培養(yǎng)基普遍應用于生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞、各種原代病毒宿主細胞、單一細胞的培養(yǎng)以及疫苗的生產(chǎn)，例如利用CHO細胞表達EPO和生產(chǎn)乙肝疫苗。低糖培養(yǎng)基更適合代謝作用較慢、依賴性貼壁細胞的培養(yǎng)。HEPES是一種優(yōu)良的生物緩沖劑，對細胞無毒性作用，添加HEPES的培養(yǎng)基能夠較長時間保持恒定的PH范圍，可以有效的防止培養(yǎng)液PH波動較大對細胞生長產(chǎn)生不利的影響?？捎糜跓oCO2培養(yǎng)箱。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑，用以持續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)液的酸堿度，在低PH值時酚紅使培養(yǎng)液呈黃色，而較高的PH值時使培養(yǎng)液呈紫色，PH值～，適合細胞培養(yǎng)。但酚紅也有一些缺點，使用不含酚紅的培養(yǎng)基。酚紅會干擾流式細胞分析時候的檢測。此外，一些無血清培養(yǎng)基的配方中若存在酚紅會干擾鈉-鉀平衡。青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”，青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成，對革蘭陽性菌特別有效；而鏈霉素能夠與細菌核糖體30S亞單位結(jié)合，抑制細菌蛋白質(zhì)的合成，對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效，但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預防絕大部分的細菌污染。高糖 DMEM 適合生長快、粘附低的細胞，如腫瘤細胞的培養(yǎng) 。

    動物細胞培養(yǎng)（animalcellculture）就是從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。細胞培養(yǎng)基的種類有哪些？按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好，常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。2.神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基可為神經(jīng)元生長提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)。IPL-41昆蟲培養(yǎng)基（IPL-41InsectMedium）旨在用于大規(guī)模擴增草地貪夜蛾（Spodopterafrugiperda）細胞系，也常用于通過桿狀病毒表達系統(tǒng)（BEVS）進行蛋白表達。IPL-41培養(yǎng)基是對原始IPL配方的改良，由美國農(nóng)業(yè)部昆蟲病理實驗室Weiss等人開發(fā)，用于大規(guī)模擴增草地貪夜蛾衍生細胞系。Weiss向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入了胎牛血清和TPB培養(yǎng)基（TryptosePhosphateBroth），成功地實現(xiàn)了IPL-21AE。MEM α 培養(yǎng)基不含核苷和脫氧核苷的MEM α培養(yǎng)基常常用作DG44和其他DHFR-缺陷型細胞的篩選培養(yǎng)基。北京醫(yī)用細胞培養(yǎng)基批發(fā)廠

DMEM培養(yǎng)基**初設計葡萄糖含量為1000mg/L（低糖型），后來又發(fā)展出葡萄糖含量為4500mg/L（高糖型）。醫(yī)用細胞培養(yǎng)基

    1.細胞培養(yǎng)基的種類按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因為Ca2+、Mg2+是細胞膜的重要組成成份，參與細胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細胞結(jié)團。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點是成分復雜，來源受限且制作過程復雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。醫(yī)用細胞培養(yǎng)基

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