Oosight影像分析系統(tǒng)采用液晶偏光成像技術(shù),無(wú)需對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行染色,即可實(shí)時(shí)、清晰、高對(duì)比度地進(jìn)行紡錘體結(jié)構(gòu)和透明帶成像,對(duì)ICSI、核移植操作、卵母細(xì)胞質(zhì)量評(píng)價(jià)等有很好的輔助作用。主要應(yīng)用ICSI:在單精胞漿注射過(guò)程中定位初級(jí)卵母細(xì)胞,避免卵的破裂損傷,增強(qiáng)胚胎的發(fā)育潛能。卵評(píng)估:利用定量的分析數(shù)據(jù)對(duì)卵進(jìn)行分級(jí),改善對(duì)胚胎的選擇。體外成熟評(píng)估:在未成熟卵催化(IVM)過(guò)程判斷成熟期,判斷依據(jù)采用的是準(zhǔn)確的識(shí)別紡錘體,而非不準(zhǔn)確的極體。質(zhì)量控制:利用定量的分析數(shù)據(jù)對(duì)卵進(jìn)行分級(jí),改善對(duì)胚胎的選擇。核移植:顯著提高核移植的成功率。由于在核摘除的過(guò)程可以清楚的看到核質(zhì),使得核移植的成功率增加了80%,并減少了線粒體DNA的摘除。卵冷凍研究:對(duì)冷凍的初級(jí)卵母細(xì)胞進(jìn)行解凍前和解凍后的定量分析,從而判斷卵的發(fā)育力,改善妊娠率。紡錘體研究:檢測(cè)胚胎中紡錘體的發(fā)育過(guò)程,確定正常和非正常分裂率(只可用于搭配有培養(yǎng)箱的顯微鏡)??梢詫?duì)染色體非正常的或非整倍體的胚胎成像,從而選擇***的前體做PGD診斷。透明帶研究:測(cè)量卵母細(xì)胞的透明帶;準(zhǔn)確測(cè)量紡錘體和透明帶中分子排列方向的差別變化,判斷紡錘體和透明帶是否處于正常狀態(tài)在細(xì)胞分裂過(guò)程中,紡錘體的形成和功能受到嚴(yán)格的調(diào)控。深圳紡錘體起偏器
紡錘體的精密導(dǎo)航作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:微管的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)與縮短:紡錘體微管的動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)和縮短是紡錘體形態(tài)變化的基礎(chǔ)。這種動(dòng)態(tài)變化不僅使紡錘體能夠適應(yīng)不同階段的細(xì)胞分裂需求,還能夠確保染色體在分裂過(guò)程中的精確定位。動(dòng)粒微管與染色體的結(jié)合:動(dòng)粒微管與染色體動(dòng)粒的結(jié)合是紡錘體牽引染色體的關(guān)鍵步驟。動(dòng)粒微管通過(guò)驅(qū)動(dòng)蛋白和動(dòng)力蛋白的介導(dǎo),與染色體動(dòng)粒緊密結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)了染色體在紡錘體中的精確定位和牽引。紡錘體微管的極性排列:紡錘體微管的極性排列決定了染色體分裂的方向和胞質(zhì)分裂面的位置。紡錘體微管從兩極向中心區(qū)域延伸,形成類(lèi)似紡錘的形狀,確保了染色體在分裂過(guò)程中能夠沿著正確的方向分離。同時(shí),紡錘中心體的形成也決定了胞質(zhì)分裂面的位置,使細(xì)胞分裂更加對(duì)稱(chēng)和穩(wěn)定。紡錘體組裝檢查點(diǎn)的調(diào)控:紡錘體組裝檢查點(diǎn)是細(xì)胞周期調(diào)控中的重要環(huán)節(jié),它確保了紡錘體在分裂過(guò)程中的完整性和準(zhǔn)確性。當(dāng)紡錘體組裝不完全或染色體動(dòng)粒未能被所有動(dòng)粒微管捕獲時(shí),紡錘體組裝檢查點(diǎn)會(huì)被激發(fā),阻止細(xì)胞進(jìn)入分裂后期。這種調(diào)控機(jī)制避免了染色體分離錯(cuò)誤導(dǎo)致的遺傳異常和細(xì)胞死亡。上海無(wú)需染色紡錘體Hoechst染料紡錘體的微管在細(xì)胞分裂后期會(huì)斷裂并重新組裝,形成新的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
近年來(lái),隨著玻璃化冷凍技術(shù)的不斷發(fā)展,成熟卵母細(xì)胞紡錘體的冷凍保存研究取得了進(jìn)展。研究表明,采用玻璃化冷凍法冷凍保存的成熟卵母細(xì)胞,在解凍后其紡錘體和染色體的形態(tài)及功能均能得到較好的保持。這主要得益于玻璃化冷凍過(guò)程中避免了冰晶形成對(duì)細(xì)胞的損傷,以及冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的有效保護(hù)。然而,值得注意的是,盡管玻璃化冷凍法在提高解凍存活率和妊娠成功率方面取得了成效,但仍存在一些問(wèn)題。例如,冷凍過(guò)程中紡錘體的微管結(jié)構(gòu)可能受到低溫的影響而發(fā)生解聚,導(dǎo)致染色體分離異常。此外,冷凍保護(hù)劑的毒性也可能對(duì)卵母細(xì)胞造成一定的損傷。為了克服這些問(wèn)題,研究者們進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)和優(yōu)化工作。例如,通過(guò)改進(jìn)冷凍保護(hù)劑的配方和濃度,降低其對(duì)細(xì)胞的毒性;通過(guò)優(yōu)化冷凍速率和程序,減少冷凍過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷;以及通過(guò)篩選和評(píng)估不同冷凍載體和保存時(shí)間對(duì)卵母細(xì)胞冷凍效果的影響,尋找好的冷凍保存條件。
冷凍與解凍過(guò)程中涉及多個(gè)環(huán)節(jié),包括溫度控制、時(shí)間控制、冷凍保護(hù)劑的添加與去除等。這些環(huán)節(jié)中的任何一步操作不當(dāng)都可能導(dǎo)致紡錘體損傷。因此,需要不斷優(yōu)化冷凍與解凍技術(shù),以減少對(duì)紡錘體的不良影響。近年來(lái),研究者們通過(guò)不斷嘗試和優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方,取得了進(jìn)展。例如,甘油、二甲基亞砜(DMSO)等滲透性保護(hù)劑被用于哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞的冷凍保存中,它們能夠迅速降低細(xì)胞內(nèi)水分含量,減少冰晶形成。同時(shí),一些非滲透性保護(hù)劑如蔗糖、海藻糖等也被發(fā)現(xiàn)對(duì)紡錘體具有一定的保護(hù)作用。紡錘體在細(xì)胞分裂后期通過(guò)微管切割機(jī)制實(shí)現(xiàn)染色體分離。
秋水仙素會(huì)使動(dòng)物細(xì)胞染色體加倍嗎微管蛋白按照來(lái)源可分為植物微管蛋白和動(dòng)物腦蛋白。因植物微管蛋白難以制備,秋水仙堿與動(dòng)物腦微管蛋白結(jié)合反應(yīng)研究得要更多一些。秋水仙堿是從植物秋水仙中提純出的一種生物堿,又名秋水仙素,構(gòu)成微管的α、β微管蛋白異源二聚體是秋水仙素分子的結(jié)合靶點(diǎn)。當(dāng)秋水仙堿與正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞接觸時(shí),秋水仙堿結(jié)合到微管蛋白的特定位點(diǎn),導(dǎo)致α微管蛋白與β微管蛋白二聚體結(jié)構(gòu)變形,從而阻斷微管蛋白組裝成微管,但并不影響微管蛋白的解聚,所以紡錘體會(huì)迅速消失。秋水仙堿的濃度和作用時(shí)間對(duì)動(dòng)、植物細(xì)胞染色體加倍的影響是關(guān)鍵。有研究結(jié)果表明,在花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂細(xì)線期與粗線期進(jìn)行美洲黑楊2n花粉的誘導(dǎo)效果比較好,總體上在減數(shù)分裂粗線期進(jìn)行誘導(dǎo)得到的2n花粉**多,并且誘導(dǎo)的比較好濃度為0.5%。劉愛(ài)生等在利用人類(lèi)外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體G顯帶制作中,在阻斷培養(yǎng)的4h內(nèi)任意時(shí)間加入相應(yīng)劑量的秋水仙素,能獲得用于G顯帶的形態(tài)完好、大小適中、分散均勻、輪廓清楚的中期染色體標(biāo)本相。陳長(zhǎng)超等利用秋水仙堿處理MⅠ期卵母細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ml期紡錘體發(fā)生解聚,染色體周?chē)忓N體微管全部消失或部分殘留,染色體排列異常。紡錘體微管網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性保證了染色體分離的準(zhǔn)確性。深圳紡錘體實(shí)時(shí)成像紡錘體液晶偏光補(bǔ)償器
紡錘體的一端連接著染色體,另一端則錨定在細(xì)胞兩極。深圳紡錘體起偏器
體外構(gòu)建的紡錘體模型可以用于研究紡錘體的動(dòng)態(tài)變化,如微管的聚合和解聚、染色體的捕捉和分離等。通過(guò)高分辨率顯微鏡觀察,可以詳細(xì)記錄紡錘體的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程,揭示其背后的分子機(jī)制。體外構(gòu)建的紡錘體模型可以用于研究紡錘體的功能機(jī)制,如紡錘體檢查點(diǎn)的調(diào)控、染色體分離的分子機(jī)制等。通過(guò)添加不同的蛋白和藥物,可以模擬不同的生理和病理?xiàng)l件,探究紡錘體功能的調(diào)控機(jī)制。體外構(gòu)建的紡錘體模型可以用于研究紡錘體缺陷的后果,如染色體非整倍性的發(fā)生、細(xì)胞周期的紊亂等。通過(guò)引入特定的突變或藥物,可以模擬紡錘體缺陷的情況,探究其對(duì)細(xì)胞分裂和基因組穩(wěn)定性的影響。體外構(gòu)建的紡錘體模型可以用于篩選和驗(yàn)證藥物,如抗病毒藥物等。通過(guò)測(cè)試藥物對(duì)紡錘體動(dòng)態(tài)變化和功能的影響,可以評(píng)估藥物的效果和安全性,為新藥的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。深圳紡錘體起偏器