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對卵子進(jìn)行評估:胚胎學(xué)家指出:有紡錘體出現(xiàn)的卵母細(xì)胞有較高的受精率和胚胎發(fā)育率,也就是說紡錘體的存在與否,可以用來評價(jià)卵母細(xì)胞胞漿的成熟度。因此胚胎學(xué)家有三次通過紡錘體對我們的卵子進(jìn)行評估的機(jī)會(huì): (1)胚胎學(xué)家可以利用偏振光顯微鏡對卵子的紡錘體進(jìn)行觀察,通過定量分析數(shù)據(jù)對卵子進(jìn)行分級,挑選出正常分裂的卵子,也就是出現(xiàn)紡錘體的卵子,進(jìn)而提高試管嬰兒的受精率。 (2)胚胎學(xué)家還可以通過紡錘體來確定體外培養(yǎng)成熟卵子(IVM)的成熟期,進(jìn)而為體外成熟卵子進(jìn)行評估,***提高試管嬰兒的受精率和胚胎發(fā)育率。 (3)由于紡錘體對環(huán)境溫度的改變非常敏感。溫度降至25℃時(shí),只需要10分鐘的時(shí)間,就會(huì)紡錘體造成不可逆的損傷。所以冷凍復(fù)蘇過程中溫度改變很有可能對卵母細(xì)胞紡錘體和染色體造成損傷。因此胚胎學(xué)家可以應(yīng)用紡錘體成像幫助選擇復(fù)蘇后具有正常紡錘體的卵母細(xì)胞,進(jìn)而可以提高受精率、卵裂率和臨床妊娠率。
綜上所述,通過***細(xì)胞的紡錘體成像技術(shù)可以避免輔助生殖技術(shù)對卵母細(xì)胞紡錘體的損傷,有助于選擇具有正常紡錘體的卵母細(xì)胞,有利于提高受精率、卵裂率和臨床妊娠率,利用更科學(xué)的方式,將讓求子路的終點(diǎn)不再那么遙遠(yuǎn)。 紡錘體微管的穩(wěn)定性受到細(xì)胞內(nèi)外多種信號的調(diào)節(jié)。上海核移植紡錘體改善分級
紡錘體是卵母細(xì)胞在減數(shù)分裂過程中形成的一種微管結(jié)構(gòu),負(fù)責(zé)精確分離染色體。然而,紡錘體對環(huán)境溫度、滲透壓等外部條件極為敏感,在冷凍保存過程中容易發(fā)生損傷,導(dǎo)致染色體分離異常,進(jìn)而影響卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力和受精后的胚胎質(zhì)量。因此,如何有效監(jiān)測和評估冷凍過程中紡錘體的變化,成為紡錘體卵冷凍研究的重要課題。紡錘體實(shí)時(shí)成像技術(shù)的出現(xiàn),為這一問題的解決提供了可能。紡錘體實(shí)時(shí)成像技術(shù)主要利用高分辨率顯微鏡結(jié)合熒光標(biāo)記技術(shù),對卵母細(xì)胞內(nèi)的紡錘體進(jìn)行實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)的觀察和記錄。常用的熒光標(biāo)記方法包括使用綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記微管蛋白,以及利用特定抗體對紡錘體相關(guān)蛋白進(jìn)行染色。通過這些方法,研究者可以清晰地觀察到紡錘體的形態(tài)、位置、動(dòng)態(tài)變化等信息,從而準(zhǔn)確評估冷凍過程中紡錘體的穩(wěn)定性和完整性。北京克隆紡錘體Oosight Basic紡錘體的一端連接著染色體,另一端則錨定在細(xì)胞兩極。
如何觀察紡錘體呢?
在普通光學(xué)顯微鏡下,人類卵母細(xì)胞是半透明的,無法對紡錘體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和分析。傳統(tǒng)方法是用一種特異的DNA熒光染料對卵母細(xì)胞染色,在紫外光下可顯示紡錘體,這種免疫熒光方法對卵母細(xì)胞有損傷,不能應(yīng)用于臨床。為了更好的觀測紡錘體,美國海洋生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的R.Oldenbourg等利用紡錘體的雙折射特性,開發(fā)出偏振光顯微鏡?,F(xiàn)今,偏振光顯微鏡已經(jīng)發(fā)展成為一種無創(chuàng)性的觀察和分析紡錘體動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)的顯微觀測系統(tǒng),我們也叫它紡錘體觀測儀。它不僅能對雙折射性紡錘體信號的有無進(jìn)行定性分析,還能對信號的強(qiáng)弱進(jìn)行定量分析。
秋水仙素會(huì)使動(dòng)物細(xì)胞染色體加倍嗎微管蛋白按照來源可分為植物微管蛋白和動(dòng)物腦蛋白。因植物微管蛋白難以制備,秋水仙堿與動(dòng)物腦微管蛋白結(jié)合反應(yīng)研究得要更多一些。秋水仙堿是從植物秋水仙中提純出的一種生物堿,又名秋水仙素,構(gòu)成微管的α、β微管蛋白異源二聚體是秋水仙素分子的結(jié)合靶點(diǎn)。當(dāng)秋水仙堿與正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞接觸時(shí),秋水仙堿結(jié)合到微管蛋白的特定位點(diǎn),導(dǎo)致α微管蛋白與β微管蛋白二聚體結(jié)構(gòu)變形,從而阻斷微管蛋白組裝成微管,但并不影響微管蛋白的解聚,所以紡錘體會(huì)迅速消失。
秋水仙堿的濃度和作用時(shí)間對動(dòng)、植物細(xì)胞染色體加倍的影響是關(guān)鍵。有研究結(jié)果表明,在花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂細(xì)線期與粗線期進(jìn)行美洲黑楊2n花粉的誘導(dǎo)效果比較好,總體上在減數(shù)分裂粗線期進(jìn)行誘導(dǎo)得到的2n花粉**多,并且誘導(dǎo)的比較好濃度為0.5%。劉愛生等在利用人類外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行染色體G顯帶制作中,在阻斷培養(yǎng)的4h內(nèi)任意時(shí)間加入相應(yīng)劑量的秋水仙素,能獲得用于G顯帶的形態(tài)完好、大小適中、分散均勻、輪廓清楚的中期染色體標(biāo)本相。陳長超等利用秋水仙堿處理MⅠ期卵母細(xì)胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ml期紡錘體發(fā)生解聚,染色體周圍紡錘體微管全部消失或部分殘留,染色體排列異常。 紡錘體,作為細(xì)胞分裂的“引擎”,驅(qū)動(dòng)著生命的延續(xù)與多樣性。
隨著技術(shù)的不斷成熟和成本的降低,無損觀察紡錘體卵冷凍技術(shù)有望在更多醫(yī)療機(jī)構(gòu)中得到應(yīng)用和推廣。這將為更多女性提供生育能力保存的機(jī)會(huì),同時(shí)也為生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展注入新的活力。此外,隨著國家對輔助生殖技術(shù)的重視和支持力度的加大,無損觀察紡錘體卵冷凍技術(shù)有望在政策層面得到更多支持和推廣。無損觀察紡錘體卵冷凍研究是一項(xiàng)具有重要意義的研究課題。通過技術(shù)創(chuàng)新和臨床應(yīng)用推廣,我們可以更好地評估卵母細(xì)胞的質(zhì)量、優(yōu)化冷凍保存條件、提高解凍后卵母細(xì)胞的存活率和發(fā)育潛能,為女性生育能力的保存和利用提供更加可靠和有效的解決方案。紡錘體微管的動(dòng)態(tài)變化是細(xì)胞分裂周期的重要標(biāo)志。紡錘體胚胎植入
紡錘體微管的數(shù)量和分布隨細(xì)胞分裂階段而變化。上海核移植紡錘體改善分級
什么是紡錘體?它有多重要?
紡錘體主要由微管蛋白組成,微管蛋白是一種含有α和β亞單位的異二聚體。紡錘體不是一成不變的,常常處于組裝和去組裝的動(dòng)態(tài)變化過程中,一般在細(xì)胞分裂的中、后期,紡錘體結(jié)構(gòu)較為典型。紡錘體主要有兩個(gè)作用:其一,排列與分配染色體;其二,決定細(xì)胞胞質(zhì)分裂的分裂面。紡錘體的完整性決定了染色體分裂過程在時(shí)間和空間上的準(zhǔn)確性。紡錘體就像一位聰明的大力士的雙手,在細(xì)胞分裂過程中,能精細(xì)的將等位染色體平均拉向細(xì)胞的兩極,確保分裂后的2個(gè)子細(xì)胞中的染色體數(shù)目相等。但是,如果這個(gè)大力士多了一只或幾只手,染色體的分配將紊亂,導(dǎo)致非整倍體。紡錘體損傷的增加多見于高齡婦女,或接觸某些化學(xué)物質(zhì)的卵母細(xì)胞。
在細(xì)胞分裂過程中,紡錘體對卵母細(xì)胞染色體的平衡、運(yùn)動(dòng)、分配、和極體的排出非常關(guān)鍵。卵母細(xì)胞成熟過程中的兩次減數(shù)分裂形成兩次紡錘體,卵母細(xì)胞受精、雌雄原核融合后又會(huì)形成有絲分裂紡錘體。 上海核移植紡錘體改善分級