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來源: 發(fā)布時間:2023-05-27

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細胞實驗外包藍白班篩選實驗的原理是什么?一些載體(如PUC系列質(zhì)粒)帶有β-半乳糖苷酶(lacZ)N端α片段的編碼區(qū),該編碼區(qū)中含有多克隆位點(MCS),可用于構(gòu)建重組子。這種載體適用于只編碼β-半乳糖苷酶C端ω片段的突變宿主細胞。因此,宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有半乳糖苷酶活性,但它們同時存在時,α片段與ω片段可通過α-互補形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。這樣,lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實現(xiàn)了互補。由α-互補而產(chǎn)生的LacZ+細菌在誘導(dǎo)劑IPTG(異丙基硫代半乳糖苷)的作用下,在生色底物X-Gal存在時產(chǎn)生藍色菌落。而當(dāng)外源DNA插入到質(zhì)粒的多克隆位點后,幾乎不可避免地破壞α片段的編碼,使得帶有重組質(zhì)粒的LacZ-細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選,稱為藍白斑篩選。

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簡述克隆某一原核生物基因片段一般操作步驟?克隆某一原核生物基因片段是可用PCR技術(shù)對基因進行大量擴增,首先準(zhǔn)備好實驗材料大體為:需擴增的模板DNA、DNA聚合酶、dNTP混合液、PCR緩沖液、引物等、其過程大體分為3個步驟:第一步:變性:通過加熱使DNA模板雙螺旋鏈解離為單鏈,第二步:退火:當(dāng)溫度突然降低時。由于模板DNA結(jié)構(gòu)復(fù)雜難再互補,而引物建構(gòu)簡單且數(shù)量巨多易于模板DNA互補雜交從而使引物結(jié)合到模板上DNA上,南京英瀚斯生物科技有限公司,醫(yī)學(xué)科研的增強子。一站式醫(yī)學(xué)科研實驗外包服務(wù)平臺。專業(yè)為您承擔(dān)該項檢測業(yè)務(wù),數(shù)據(jù)真實無重復(fù),報告內(nèi)容詳盡。歡迎來電垂詢。細胞實驗外包。第三步:延伸:在DNA聚合酶和四種底物及鎂離子存在條件下DNA連開始延伸。以上3個步驟為一個循環(huán),數(shù)小時后即可得到大量擴增的目的片段。細胞實驗外包的方法和要求。云南生物細胞實驗外包價格

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